使用及效果:
標準的PCR反應(yīng)體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 大豆內(nèi)源基因Lectin檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64511
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
松口蘑絲氨酸/蘇氨酸激酶蛋白Pim1抗體Anti-CDH3 Antibody胰島素樣生長因子Ⅰ受體(IGF-ⅠR)ELISA試劑盒
蠟狀芽孢桿菌磷酸化前病整合位點蛋白1抗體Anti-CDH4 Antibody胰島素樣生長因子1受體(IGF-R1)ELISA試劑盒
果生核盤菌肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體Anti-CDH3 Antibody胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)ELISA試劑盒
產(chǎn)氣莢膜梭菌 素E型磷酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體Anti-CDH5 Antibody血小板內(nèi)皮粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA試劑盒
巴西固氮螺菌磷酸化孕受體抗體Anti-CDK1 Antibody血小板內(nèi)皮粘附分子1(PECAM1)ELISA試劑盒
解鳥氨酸克雷伯氏菌磷酸化磷脂酰肌激酶(PI3Kβ)抗體Anti-CDK1 Antibody(PB0561)血小板/內(nèi)皮粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA試劑盒
黑腐皮殼菌磷酸化蛋白磷酸酶2A(PP2Aα)抗體Anti-CDK2 Antibody(PB0562)血小板/內(nèi)皮粘附分子1(PECAM1)ELISA試劑盒
葡萄酒色被孢霉絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶5抗體Anti-CDK2 Antibody血漿炎性趨化因子(CXCL9/MIG)ELISA試劑盒
大腸埃希菌蛋白激酶Cα相互作用蛋白1抗體Anti-CDK5 Antibody胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TAFA/CCL17)ELISA試劑盒
鏈格孢菌磷酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Anti-CDK16 Antibody外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN/CD147)ELISA試劑盒
硫磺菌蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1A抗體Anti-CDK4 Antibody凋亡因子配體(Fas-Ligand)ELISA試劑盒
地霉蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B抗體Anti-CDK4 Antibody(PB0563)糖蛋白130(gp130/CD130)ELISA試劑盒
酒紅鏈霉菌蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基3A抗體Anti-CDK5 Antibody胎球蛋白A(Fetuin-A)ELISA試劑盒
膠孢蛋白質(zhì)磷酸酶1B抗體(PP2Cβ)Anti-CDK5R1 Antibody胎球蛋白A(FetuinA)ELISA試劑盒
球孢白僵菌蛋白質(zhì)磷酸酶1G抗體(PP2Cγ)Anti-CDK6 Antibody酸性成纖維生長因子(FGF1)ELISA試劑盒
亮白曲霉6磷酸果糖激酶1抗體Anti-CDK6 Antibody酸性成纖維生長因子(AFGF/FGF1)ELISA試劑盒
大豆內(nèi)源基因Lectin檢測試劑盒(熒光-PCR法)人載脂蛋白D(ApoD)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LSM7 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶4型抗體
人載脂蛋白E(ApoE)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LSR ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
人載脂蛋白F(ApoF)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LUC7L2 ELISA Kit磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體
人載脂蛋白H(ApoH)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LUC7L ELISA Kit絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR抗體
人載脂蛋白M(ApoM)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶18抗體
人碳酸酐酶VI(CA6)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LUZP1 ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體
人載脂蛋白A5(ApoA5)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LXN ELISA Kit銜接蛋白β抗體
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
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