使用及效果:
標準的PCR反應(yīng)體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 轉(zhuǎn)基因植物Cry1A(c)基因檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64508
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
副結(jié)核補體結(jié)合試驗抗原蛋白S抗體Anti-CD73/Nt5e Antibody3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1)ELISA試劑盒
球孢白僵菌多瘤病增強了結(jié)合蛋白2β抗體Anti-CD74 Antibody3-葡萄糖苷酸孕二(PdG)ELISA試劑盒
芽孢桿菌屬磷酸二酯酶4D抗體Anti-CD79A Antibody28S抗核糖體抗體(28S rRNP)ELISA試劑盒
木素木霉前纖維蛋白2抗體Anti-CD79B Antibody(PB0117)26S蛋白酶體非ATP酶調(diào)節(jié)亞基11(PSMD11)ELISA試劑盒
絨邊乳菇脯氨酰羧肽酶抗體Anti-CD8 Alpha/Cd8a Antibody26S蛋白酶體(26S PSM)ELISA試劑盒
絳紅產(chǎn)色小單胞菌P2Y4受體抗體Anti-CD8 alpha/Cd8a Antibody25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒
乳酸乳球菌乳亞種瘤促活化因子3抗體Anti-CD81 Antibody25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒
枯斑擬盤多毛孢磷脂酰乙結(jié)合蛋白1抗體Anti-CD80 Antibody25羥基維生素D2(25 HVD2)ELISA試劑盒
石蕊素鏈霉菌外周蛋白抗體Anti-CD79A Antibody(PB0116)20S蛋白酶體(20SP)ELISA試劑盒
日本裂殖酵母人前列腺特異性抗原單克隆抗體(包被)Anti-CD80 Antibody2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒
尖角凸臍蠕孢鼠抗人前列腺特異性抗原單克隆抗體(檢測)Anti-CD81 Antibody2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒
真姬菇抑制素/腫瘤抑制因子抗體Anti-CD81 Antibody2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒
總狀共頭霉脂蛋白磷脂酶A2抗體Anti-CD81 Antibody2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA試劑盒
球形芽孢桿菌重組金黃色葡萄球菌蛋白A抗體Anti-CD86 Antibody2 型次核苷酸脫氫酶(IMPDH)(IMPDH2)ELISA試劑盒
固氮菌雌受體共調(diào)節(jié)因子抗體Anti-CD82 Antibody1型1-磷酸鞘氨受體(S1P1)ELISA試劑盒
尖孢鐮孢PSP抗體Anti-CD82 Antibody(PB0118)17酮皮質(zhì)類固(17-KS)ELISA試劑盒
轉(zhuǎn)基因植物Cry1A(c)基因檢測試劑盒(熒光-PCR法)人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LY96 ELISA Kit糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體
人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LY6K ELISA Kit血管緊張素Ⅱ抗體
人抗II型膠原抗體(Anti-CIIAb)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LYAR ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體1抗體
人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LYG1 ELISA Kit血管**素-1抗體
人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP-7)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LYN ELISA Kit膜粘連蛋白5抗體
人膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2 )酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒 Human LYPLA1 ELISA Kit重組膜粘連蛋白5抗體
人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)酶聯(lián)疫吸附測定試劑盒Human LYRM7 ELISA Kit銜接蛋白α-Adaptin抗體
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
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