使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 人細(xì)小病毒B19(HPV B19)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號(hào):BH-P64449
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
鉆特省芽孢桿菌類固受體激活蛋白3抗體Human FAS(Tumor necrosisfactor receptor superfamily member 6) ELISA Kit谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒
EC600*軸突導(dǎo)向因子1抗體Human FASL(Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA試劑盒
塔賓曲霉酪氨酸激酶B抗體Human FETUA(Fetuin A) ELISA Kit谷氨酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA試劑盒
巴氏醋桿菌跨膜受體蛋白Notch-3抗體Human FGF19(Fibroblast growth factor 19)谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒
巴氏生孢八疊球菌中性粒彈性蛋白酶ELANE抗體Human FGF7(Fibroblast growth factor 7) ELISA Kit谷氨酸脫羧酶65(GAD65)ELISA試劑盒
根瘤菌型肝炎病NS4B(65kDa)抗體Human FGF21(Fibroblast growth factor 21) ELISA Kit谷氨酸脫羧酶(GAD)ELISA試劑盒
嗜冷桿菌神經(jīng)生長因子受體相關(guān)蛋白1抗體Human FGF9(Fibroblast growth factor 9) ELISA Kit谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒
紫晶臘蘑死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體Human FGF4(Fibroblast growth factor 4) ELISA Kit谷氨酸受體(NMDAR)ELISA試劑盒
淡紫擬青霉神經(jīng)絲蛋白抗體Human FN1(Fibronectin) ELISA Kit谷氨酸-半胱氨酸連接酶調(diào)節(jié)亞基(GCLM)ELISA試劑盒
微管螺旋鏈霉菌磷酸化核因子抗體Human FCN1(Ficolin-1) ELISA Kit谷氨酸[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)ELISA試劑盒
仰光鏈霉菌跨膜受體蛋白Notch-1抗體Human CHI3L1(Chitinase-3-like protein 1) ELISA Kit孤腓肽(OFQ/N)ELISA試劑盒
鐮刀菌屬磷酸化核受體Rev-Erbα抗體Human DCN(Decorin) ELISA Kit鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)ELISA試劑盒
鴨疫里氏桿菌雞新城疫病抗體Human CST3(Cystatin C) ELISA Kit鉤端螺旋體IgG(Leptospira)ELISA試劑盒
粘質(zhì)沙雷氏菌還原型輔酶Ⅱ/磷酸酰腺嘌呤二核苷酸抗體Human SLAM/CD150(Signaling Lymphocytic Activation Molecule) ELISA Kit鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA試劑盒
塔里木類芽孢桿菌NIT2蛋白抗體Human c-MET(Hepatocyte growth factor receptor) ELISA Kit睪酮受體(TR)ELISA試劑盒
鱈鹽球菌神經(jīng)分化因子1抗體Human C5a(Complement Component 5a) ELISA Kit睪酮(Testoterone)ELISA試劑盒
人細(xì)小病毒B19(HPV B19)檢測試劑盒(熒光-PCR法)性核蛋白1/鋅指蛋白basonuclin抗體白細(xì)胞介素1α(IL-1α/IL-1F1)檢測試劑盒IL-1α/IL-1F1 ELISA Kit
癌膜蛋白11抗體(前梯度同源蛋白2)白細(xì)胞介素1α(IL-1α)檢測試劑盒IL-1α ELISA Kit
人腦鈉素單克隆抗體白細(xì)胞介素17(IL-17)檢測試劑盒IL-17 ELISA Kit
B**成熟因子抗體白細(xì)胞介素16(IL-16)檢測試劑盒IL-16 ELISA Kit
促凋亡Bik蛋白抗體白細(xì)胞介素13(IL-13)檢測試劑盒IL-13 ELISA Kit
癌抑癌蛋白抗體白細(xì)胞介素12(IL-12/P70)檢測試劑盒IL-12/P70 ELISA Kit
癌易感因環(huán)狀結(jié)構(gòu)域蛋白抗體白細(xì)胞介素12(IL-12/P40)檢測試劑盒IL-12/P40 ELISA Kit
癌相關(guān)抗原BRCAA1抗體白細(xì)胞介素10(IL-10)檢測試劑盒IL-10 ELISA Kit
腦組織表達(dá)X連鎖蛋白1抗體白細(xì)胞分化抗原配體40(CD40/TNFRSF5)檢測試劑盒CD40/TNFRSF5 ELISA Kit
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。