PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 鉤端螺旋體(Lep)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64443
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

使用及效果:
標準的PCR反應(yīng)體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
嗜熱鏈球菌磷酸化谷氨酸受體1抗體Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit紅**素受體(EPOR)ELISA試劑盒
Aquibacillus halophilus磷酸化谷氨酸受體1抗體Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit紅**素(EPO)ELISA試劑盒
角鱗灰鵝膏菌神經(jīng)束蛋白186抗體Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit紅膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒
鐮孢菌磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體Human NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit紅激因子(ESF)ELISA試劑盒
泡囊短波單胞菌磷酸化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human NID-1(Nidogen-1/Entactin) ELISA Kit橫紋肌輔肌動蛋白α(sm Actinin-α)ELISA試劑盒
溜曲霉磷酸化谷氨酸受體1抗體Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit亨廷頓相關(guān)蛋白1(HAP1)ELISA試劑盒
酵母菌類固受體激活蛋白2抗體Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit黑素瘤衍生亮氨酸拉鏈額外核因子(MLZE)ELISA試劑盒
緊密青霉胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit黑色素抗體(MC Ab)ELISA試劑盒
枯草芽孢桿菌核小體組裝蛋白1抗體Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit黑色素(MSH)ELISA試劑盒
葡萄座腔菌N-鈣粘附分子抗體Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit黑色素濃縮(MCH)ELISA試劑盒
釀酒酵母核受體輔助抑制因子1抗體Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒
單色革蓋菌腎小球粘附分子受體抗體Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit黑色素瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)ELISA試劑盒
鹽古桿菌巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)ELISA試劑盒
蒂莫內(nèi)馬賽菌巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒
黑芝蛋白激酶錨定蛋白抗體Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit核轉(zhuǎn)錄因子κBp65(NFκBp65)ELISA試劑盒
枯草芽孢桿菌絲氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1抗體Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit核轉(zhuǎn)錄因子κB(NFκB)ELISA試劑盒
鉤端螺旋體(Lep)檢測試劑盒(熒光-PCR法)信號轉(zhuǎn)導分子SMAD5抗體雙(環(huán)己)草酰二腙 Bis(cyclohexanone) OxalyldihydrazoneHuman, Mouse
硒結(jié)合蛋白1抗體3,3'-氧二 3,3'-Oxydipropionitrile >98.0%(GC)Human
SMAD家族9抗體3,3'-氧二 3,3'-Oxydipropionitrile >98.0%(GC)Human, Mouse
轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活蛋白SNF5抗體3,3'-氧二 3,3'-Oxydipropionitrile >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
信號傳導T**活化相關(guān)蛋白抗體雙(2-乙) Bis(2-chloroethyl) Ether >99.0%(GC)Human, Mouse
唾液結(jié)合**球蛋白樣凝集素9抗體雙(2-羥乙)二硫代氨鋅鹽(II) Bis(2-hydroxyethyl)dithiocarbamic Acid Zinc(II) Salt >98.0%(T)Human
心血管調(diào)節(jié)肽Salusin-α抗體雙(2-羥乙)二硫代氨銅(II) Copper(II) Bis(2-hydroxyethyl)dithiocarbamate >98.0%(T)Human, Mouse, Rat
S100B蛋白抗體N,N-雙(2-羥乙)-3-苯 N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-3-chloroaniline >90.0%(GC)Human
轉(zhuǎn)錄因子SOX-11蛋白抗體二乙二二乙 Diethylene Glycol Diethyl Ether >98.0%(GC)Human, Mouse