使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種(KP)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64434
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
異常漢遜酵母異常變種一氧化氮合成酶-3(內(nèi)皮型)抗體Human CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒
白金針14孤菲肽受體/痛敏肽受體抗體Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒
異常漢遜酵母鈉轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體Human FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒
相思根瘤菌P物質(zhì)受體抗體Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒
蘇云金芽胞桿菌神經(jīng)激肽B受體抗體Human 5-NT(5-Nucleotidase) ELISA Kit膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒
雞傷寒沙門氏菌腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗體Human AAA(Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒
腐皮殼腫瘤抑制基因抗體Human ABCC5(ATP Binding Cassette Transporter C5) ELISA Kit降脂素(Adipsin)ELISA試劑盒
棉子糖乳球菌腫瘤抑制基因抗體Human ABCG1(ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit降解加速因子(DAF)ELISA試劑盒
產(chǎn)酸克雷伯氏菌孤菲肽/痛敏肽抗體Human AAHA(Anti-Apolipoprotein Antibody) ELISA Kit降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒
紫色紅曲軸索過度生長抑制因子受體/Nogo受體抗體Human ACA-IgG(Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒
玉米黑粉菌神經(jīng)元引導(dǎo)蛋白3抗體Human ACAT2(Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2, cytosolic) ELISA Kit降鈣素(CT)ELISA試劑盒
釀酒酵母性受體NK-p46抗體Human ACHAP(Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit堿性胎兒蛋白(BFP)ELISA試劑盒
鐮刀菌屬神經(jīng)組織特異性F肌動蛋白結(jié)合蛋白2抗體Human ACC(Acetyl-CoA Carboxylase) ELISA Kit堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒
枯草芽孢桿菌NYS48蛋白抗體Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit堿性亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子ATF樣蛋白(BATF)ELISA試劑盒
杏鮑菇肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit堿性成纖維生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒
靈芝非霍奇金瘤重復(fù)蛋白2抗體Human ANXA5(Annexin A5) ELISA Kit堿性成纖維生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒
肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種(KP)檢測試劑盒(熒光-PCR法)鋅指蛋白913抗體環(huán)阿屯 CYCLOARTENOL(P)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白450抗體環(huán)阿屯 CYCLOARTENOL(P)(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白20D3抗體松馳素 J CYTOCHALASIN J(RG)Human
鋅指蛋白BED3抗體S- 烯別半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(P)Human, Rat
鋅指蛋白ZBTB38抗體S- 烯別半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(P)Human, Mouse
鋅結(jié)合乙脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體S- 烯別半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(RG)Human, Mouse
鋅指蛋白ZBTB3抗體S- 烯別半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(RG)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白ZBBX抗體S- 烯別半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(RG)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白219抗體松馳素 H CYTOCHALASIN H(RG)Human, Mouse, Rat
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。