使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 巴爾通體(BE)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64427
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
粘著劍菌線粒體鈉/氫交換蛋白質(zhì)2抗體Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) ELISA Kit人抗紅抗體(RBC)ELISA試劑盒
喇叭菌神經(jīng)元素1抗體Human BAX(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒
豆芽菌1-2神經(jīng)肽Y抗體Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) ELISA Kit人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)ELISA試劑盒
枯草芽孢桿菌神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) ELISA Kit人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒
球孢白僵菌谷氨酸受體2B抗體Human CEACAM1(Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1) ELISA Kit人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒
單胞菌屬神經(jīng)纖毛蛋白2抗體Human C9(Complement component C9) ELISA Kit人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒
枯斑擬盤多毛孢谷氨酸受體2D抗體Human BCL11B(B-cell lymphoma/leukemia 11B) ELISA Kit人抗核仁抗體(ANA)ELISA試劑盒
香栓孔菌原癌基因N-Ras抗體Human CCL28(C-C motif chemokine 28) ELISA Kit人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒
耐鹽考克氏菌T激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體Human NPS(Neuropeptide S) ELISA Kit人抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒
地下鹽單胞菌腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒
蘇云金芽孢桿菌軸突蛋白2抗體Human CD28(T-cell-specific surface glycoprotein CD28) ELISA Kit人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)ELISA試劑盒
殼菌腎小球粘附分子受體抗體Human APOA2(Apolipoprotein A-II) ELISA Kit人抗高爾基體抗體(AGAA)ELISA試劑盒
變粉紅鎖擲孢酵母神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human CD276(CD276 antigen) ELISA Kit人抗肝膜抗體(LMA)ELISA試劑盒
腐皮殼軸突生長誘向因子G2抗體Human CTSL2(Cathepsin L2) ELISA Kit人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA試劑盒
類干酪乳桿菌黑色素瘤硫酸軟骨素蛋白多糖4抗體Human COR(Cortisol) ELISA Kit人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA試劑盒
金黃色葡萄球菌NDST1蛋白抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體-IgM(HIT)ELISA試劑盒
巴爾通體(BE)檢測試劑盒(熒光-PCR法)鋅指蛋白239抗體ENANTHOYLOXYNORANDROST-4-EN-17-ONE, 3-(P)Human, Mouse
鋅指蛋白426抗體DEHYDROMARMIN, 6'-(RG)(PLEASE CALL)Human, Rat
磷化鋅指蛋白598抗體ENANTHOYLOXYANDROST-4-EN-17-ONE, 3-(P)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白423抗體ENANTHOYLOXYANDROST-4-EN-17-ONE, 3-(P)Human, Mouse
鋅指蛋白830抗體普拉雄庚酯 ENANTHOYLOXYANDROST-5-EN-17-ONE, 3-(P)Human, Mouse, Rat
受精卵抑制蛋白1樣蛋白抗體普拉雄庚酯 ENANTHOYLOXYANDROST-5-EN-17-ONE, 3-(P)Human
抑癌蛋白5/鋅指蛋白434抗體醋雙烯酯 DEHYDROPREGNENOLONE ACETATE, 16-(RG)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白925抗體醋雙烯酯 DEHYDROPREGNENOLONE ACETATE, 16-(RG)Human, Mouse
線粒體二羧載體蛋白20抗體DELPHINIDIN-3-O-RHAMNOSIDE CHLORIDE(RG)Human
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。