使用及效果:
標準的PCR反應體系:
10×擴增緩沖液   10ul
4種dNTP混合物   各200umol/L
引物   各10~100pmol
模板DNA       0.1~2ug
   Taq DNA聚合酶   2.5u
Mg2+       1.5mmol/L
加雙或三蒸水至  100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 猩紅熱鏈球菌(SS)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64421
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
		
		
			
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①??物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
		
		
			
PCR反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
樟疫霉粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗增殖核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒
		
		
			貝倫格勒座腔菌梨?;驼车鞍?/span>4抗體Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗載脂蛋白抗體A1(Apo A1)ELISA試劑盒
		
		
			釀酒酵母v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白/T活化蛋白(TAP)ELISA試劑盒
		
		
			Phoma medicaginis var. medicaginis基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗體Human PENK(Proenkephalin-A) ELISA Kit人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)ELISA試劑盒
		
		
			松乳菇突變型P53抗體Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)ELISA試劑盒
		
		
			黃蓋蜜環(huán)菌蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體Human ARSA(Arylsulfatase A) ELISA Kit人抗胰島素受體抗體(AIRA)ELISA試劑盒
		
		
			粉狀畢赤氏酵母基質(zhì)金屬蛋白酶-24抗體Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒
		
		
			黑絡(luò)丸巨噬甘露糖受體抗體Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒
		
		
			釀酒酵母胃粘液素抗體Human ATOH1(Protein atonal homolog 1) ELISA Kit人抗血小板抗體IgM(PA-IgM)ELISA試劑盒
		
		
			枯草芽孢桿菌基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體Human KLF14(Krueppel-like factor 14) ELISA Kit人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒
		
		
			平臍蠕孢菌尿調(diào)節(jié)蛋白抗體Human MYH9(Myosin-9) ELISA Kit人抗血小板抗體IgG(PA-IgG)ELISA試劑盒
		
		
			根瘤菌肌增強因子2抗體Human AMSH(alpha-MSH) ELISA Kit人抗血小板抗體IgA(PA-IgA)ELISA試劑盒
		
		
			枯草芽孢桿菌肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體Human PRSS2(Trypsin-2) ELISA Kit人抗血小板抗體(anti-PA Ab)ELISA試劑盒
		
		
			越南芽孢桿菌神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗體Human IL17RB(Interleukin-17 receptor B) ELISA Kit人抗胸腺球蛋白(ATG)ELISA試劑盒
		
		
			釀酒酵母組織相關(guān)抗原HLA-B15抗體Human CDO1(Cysteine dioxygenase type 1) ELISA Kit人抗信號識別顆??贵w(SRP)ELISA試劑盒
		
		
			Gordonia蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶抗體Human CYP2D6(Cytochrome P450 2D6) ELISA Kit人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒
猩紅熱鏈球菌(SS)檢測試劑盒(熒光-PCR法)小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ升麻素苷(標準品)Human, Mouse
		
		
			人抑制素升麻-3-O-α-L-拉伯糖苷(標準品)Human, Mouse
		
		
			人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白生脈提取物(標準品)Human, Mouse, Rat
		
		
			小鼠腫瘤壞死因子α勝紅薊(標準品)Human, Mouse, Rat
		
		
			大鼠B**瘤因子2圣草次苷(標準品)Human, Mouse
		
		
			大鼠CXC趨化因子受體3圣草酚(標準品)Human, Mouse
		
		
			小鼠腫瘤壞死因子β蓍草(標準品)Human
		
		
			人食欲素/阿立新B十七碳酯(標準品)Human
		
		
			小鼠Ⅳ型膠原石菖蒲(標準品)Human, Mouse
設(shè)計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。