使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液   10ul
4種dNTP混合物   各200umol/L
引物   各10~100pmol
模板DNA       0.1~2ug
   Taq DNA聚合酶   2.5u
Mg2+       1.5mmol/L
加雙或三蒸水至  100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 表皮葡萄球菌(SE)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號(hào):BH-P64416
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
	
	
		
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
	
	
		
PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
Corynebacterium variabile磷酸化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶結(jié)合蛋白1抗體Human HSF1(Heat shock factor protein 1) ELISA Kit酪氨酰tRNA合成酶(YARS)ELISA試劑盒
	
	
		米根霉磷酸化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶結(jié)合蛋白1抗體Human PDE5A(cGMP-specific 3′,5′-cyclic phosphodiesterase) ELISA Kit酪氨酰DNA磷酸二酯酶1(TDP1)ELISA試劑盒
	
	
		薔薇放線孢磷酸化絲裂原活化蛋白激酶3抗體Human IFNGR1(Interferon gamma receptor 1) ELISA Kit酪氨酸羥化酶(TH)ELISA試劑盒
	
	
		海洋青銅小單孢菌磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體Human SOX2(Transcription factor SOX-2) ELISA Kit酪氨酸激酶2(Tyk-2)ELISA試劑盒
	
	
		玫煙色棒束孢磷酸化肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Human SHBG(Sex hormone-binding globulin) ELISA Kit酪氨酸蛋白激酶受體TYRO3(TYRO3)ELISA試劑盒
	
	
		大腸埃希氏菌磷酸化肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Human FGF5(Fibroblast growth factor 5) ELISA Kit狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)ELISA試劑盒
	
	
		赭色擲孢酵母磷酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體Human TAC1(Protachykinin-1) ELISA Kit蘭尼堿受體2(RYR2)ELISA試劑盒
	
	
		廣東頸槽蛇菌磷酸化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激酶抗體Human HMGB1(High mobility group protein B1) ELISA Kit賴氨酰氧化酶(LOX)ELISA試劑盒
	
	
		鹽地桿菌磷酸化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激酶抗體Human SHBG(Sex hormone-binding globulin) ELISA Kit賴氨酸特異性脫甲基酶5A(JARID1A)ELISA試劑盒
	
	
		黑曲霉磷酸化造血祖激酶抗體Human FGF5(Fibroblast growth factor 5) ELISA Kit萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA試劑盒
	
	
		微小桿菌p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激酶抗體Human HMGB1(High mobility group protein B1) ELISA Kit醌NADH脫氫酶1(NQO1)ELISA試劑盒
	
	
		小馬勃5-1肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Human FADS2(Fatty acid desaturase 2) ELISA Kit跨膜結(jié)構(gòu)域4亞家族成員11(MS4A11)ELISA試劑盒
	
	
		英杜被孢霉磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體Human MAX(Protein max) ELISA Kit空泡素相關(guān)蛋白A(VacA)ELISA試劑盒
	
	
		釀酒酵母磷酸化氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體Human APH1A(Gamma-secretase subunit APH-1A) ELISA Kit空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒
	
	
		盤長(zhǎng)孢狀盤孢髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體Human TBX1(T-box transcription factor TBX1) ELISA Kit克雷白氏桿菌(klebsiella)ELISA試劑盒
	
	
		淡紅擬口蘑巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體Human PLA2G6(85 kDa calcium-independent phospholipase A2) ELISA Kit克拉拉蛋白(CC16)ELISA試劑盒
表皮葡萄球菌(SE)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2澤瀉C-23-醋酯;澤瀉C單乙酯Human, Mouse
	
	
		小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9澤瀉F(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		人Ⅰ型膠原C端肽粘委陵菜(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		大鼠脂蛋白磷脂酶A2戰(zhàn)骨(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3獐牙菜苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		人粘蛋白/粘液素5AC獐牙菜苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		大鼠熱休克蛋白90樟腦(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		人氨轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶掌葉防已;巴馬汀,黃藤素;(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		大鼠熱休克蛋白70柘木(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。