使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液   10ul
4種dNTP混合物   各200umol/L
引物   各10~100pmol
模板DNA       0.1~2ug
   Taq DNA聚合酶   2.5u
Mg2+       1.5mmol/L
加雙或三蒸水至  100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 鼠疫桿菌(YP)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64384
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
	
	
		
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成??應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
	
	
		
PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
鮑魚側(cè)耳層粘蛋白α2抗體Human p35 ELISA Kit水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒
	
	
		冷海水黃桿菌內(nèi)皮脂肪酶抗體Human OXER1 ELISA Kit雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒
	
	
		短密青霉可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1抗體Human OXCT2 ELISA Kit衰變加速因子(DAF/CD55)ELISA試劑盒
	
	
		鞘氨單胞菌屬層粘連蛋白β2抗體Human p35 ELISA Kit鼠嗜酸粒趨化因子(ECF)ELISA試劑盒
	
	
		錐形赤褶菇白衍生化學(xué)吸引素抗體Human P4HA3 ELISA Kit瘦素受體(LeptinR)ELISA試劑盒
	
	
		豬丹絲菌T易位蛋白2抗體Human OXER1 ELISA Kit瘦素受體(LEPR)ELISA試劑盒
	
	
		越南芽孢桿菌酪氨酸磷酸酶受體相互作用蛋白Liprin α1抗體Human OTOP3 ELISA Kit瘦素(Leptin)ELISA試劑盒
	
	
		紅緣層孔菌線粒體離子肽酶1抗體Human OTOR ELISA Kit瘦素(LEP)ELISA試劑盒
	
	
		平田頭菇10-4微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體Human P4HA3 ELISA Kit受體型酪氨酸蛋白磷酸酶樣N(PTPRN)ELISA試劑盒
	
	
		大腸埃希菌假定腫瘤抑制亮氨酸拉鏈蛋白1抗體Human USO1(Protein USO1 homolog) ELISA Kit受體酪氨酸激酶(RTKs)ELISA試劑盒
	
	
		嗜酸乳桿菌乳酸脫氫酶LDH-C(腫瘤/抗原32)抗體Human p130Cas ELISA Kit受體TNFRSF結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2(RIPK2)ELISA試劑盒
	
	
		高盧蜜環(huán)菌腫瘤抑制基因LUCA15抗體Human p150 glued ELISA Kit受磷蛋白(PLN)ELISA試劑盒
	
	
		黑根霉特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human P15RS ELISA Kit嗜伊紅顆粒主要堿性蛋白(EMBP/MBP)ELISA試劑盒
	
	
		聚生殼菌RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體Human p19 INK4d ELISA Kit嗜酸性粒陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒
	
	
		枯草芽孢桿菌枯草亞種磷酸化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體Human ACP5(TartRate-resistant acid phosphatase type 5) ELISA Kit嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員3(EAR3)ELISA試劑盒
	
	
		沃氏富鹽菌磷酸化特異性蛋白酪氨酸激酶抗體Human OVCA2 ELISA Kit嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員2(EAR2)ELISA試劑盒
鼠疫桿菌(YP)檢測試劑盒(熒光-PCR法)小鼠還原型谷胱甘肽雷酚內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		植物吲哚乙雷公藤春Human
	
	
		大鼠可溶性白介素6受體雷公藤次(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		兔可溶性凋亡相關(guān)因子雷公藤定Human, Mouse, Rat
	
	
		人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子雷公藤紅素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		兔6前列腺素F1a雷公藤素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		小鼠肌鈣蛋白T雷公藤晉Human, Mouse
	
	
		大鼠吡啶酚雷公藤內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		麥胚凝集素/凝集蛋白雷公藤內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。