使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液   10ul
4種dNTP混合物   各200umol/L
引物   各10~100pmol
模板DNA       0.1~2ug
   Taq DNA聚合酶   2.5u
Mg2+       1.5mmol/L
加雙或三蒸水至  100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 沙門氏菌(SPP)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號(hào):BH-P64379
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
	
	
		
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
	
	
		
PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
乳桿菌屬淺表層粘膜蛋白多糖抗體Human PCDH9 ELISA Kit羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒
	
	
		戊糖乳桿菌調(diào)控胚胎干分化蛋白Lhx2抗體Human PCDHA2 ELISA Kit羰基還原酶[NADPH] 1(CBR1/CBR/CRN)ELISA試劑盒
	
	
		馬紅球菌LRRC2蛋白抗體Human PBXIP1 ELISA Kit碳酸酐酶9(CA9)ELISA試劑盒
	
	
		微小根毛霉神經(jīng)突觸蛋白NGL3抗體Human PCBD1 ELISA Kit碳酸酐酶6(CA-6)ELISA試劑盒
	
	
		蟬花1-13(可訂)致盲基因LCA5樣蛋白抗體Human PCDHGC3 ELISA Kit碳酸酐酶3(CA3)ELISA試劑盒
	
	
		肺形側(cè)耳(鳳尾菇)致盲基因LCA5蛋白抗體Human PCF11 ELISA Kit碳酸酐酶2(CA-2)ELISA試劑盒
	
	
		假單胞菌屬轉(zhuǎn)錄因子LHX6抗體Human PCBD2 ELISA Kit碳酸酐酶2(CA2)ELISA試劑盒
	
	
		絨蓋干酪菌磷酸化腫瘤抑制基因LATS1/LATS2抗體Human PCBP2 ELISA Kit碳酸酐酶12(CA-12)ELISA試劑盒
	
	
		揚(yáng)奇青霉轉(zhuǎn)錄因子LBX1抗體Human ICTP(Cross-linked C-terminal opeptide of Collagen alpha-1(I) chain) ELISA Kit碳酸酐酶(CA)ELISA試劑盒
	
	
		里氏木霉神經(jīng)特異性轉(zhuǎn)錄因子LDB1抗體Human PCDH11Y ELISA Kit肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)ELISA試劑盒
	
	
		香菇白化學(xué)吸引素2抗體Human PCDH11X ELISA Kit肽酰脯氨酰異構(gòu)酶(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)ELISA試劑盒
	
	
		嗜線蟲致病桿菌LHX5蛋白抗體Human PCDHA3 ELISA Kit肽聚糖識(shí)別蛋白L(PGRP-L)ELISA試劑盒
	
	
		松口蘑單絲氨酸蛋白激酶1+2抗體Human PCDHA2 ELISA Kit肽聚糖(PG)ELISA試劑盒
	
	
		人參土地桿菌LIN7C蛋白抗體Human PCDH9 ELISA Kit肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(PPI)ELISA試劑盒
	
	
		富含亮氨酸重復(fù)序列Nogo受體反應(yīng)蛋白4抗體Human PCDHGB3 ELISA Kit胎球蛋白A(Fetuin A)ELISA試劑盒
	
	
		地衣芽孢桿菌富含亮氨酸α2糖蛋白抗體Human PBRM1 ELISA Kit胎球蛋白A(FETU-A)ELISA試劑盒
沙門氏菌(SPP)檢測試劑盒(熒光-PCR法)小鼠補(bǔ)體蛋白4浙貝母(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		小鼠素鷓鴣菜(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		大鼠熱休克蛋白40珍珠(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		人天門冬氨轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶珍珠母(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		大鼠熱休克蛋白20正丁苯酞;丁酞內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		人肝脂酶正二十九烷Human, Mouse
	
	
		小鼠α2抗纖溶酶芝麻林素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		小鼠α2纖溶酶抑制物芝麻素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		人乙酰肝素酶知母(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。