使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴增緩沖液   10ul
4種dNTP混合物   各200umol/L
引物   各10~100pmol
模板DNA       0.1~2ug
   Taq DNA聚合酶   2.5u
Mg2+       1.5mmol/L
加雙或三蒸水至  100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64369
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
	
	
		
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
	
	
		
PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
比阿婁維扎青霉 磷酸化特異性蛋白酪氨酸激酶抗體Human PKD2L1 ELISA Kit因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)ELISA試劑盒
	
	
		枯草芽孢桿菌膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體Human PIWIL2 ELISA Kit纖維連接蛋白(cFn)ELISA試劑盒
	
	
		黑腐皮殼磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體Human PIP5K1A ELISA Kit外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒
	
	
		解脂假絲酵母磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體Human PJA1 ELISA Kit色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA試劑盒
	
	
		洛格酵母腦瘤相關(guān)基因抗體Human PIP5K1B ELISA Kit色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒
	
	
		香菇大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體Human PIP5K3 ELISA Kit色素P450(CYP450)ELISA試劑盒
	
	
		相思根瘤菌神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體Human PIP5KL1 ELISA Kit色素c氧化酶Ⅵα亞基多肽1(COX6A1)ELISA試劑盒
	
	
		大腸埃希氏桿菌富含亮氨酸重復(fù)序列/Ⅲ型纖維連接蛋白4抗體Human PITPNA ELISA Kit色素C氧化酶(COX)ELISA試劑盒
	
	
		球孢白僵菌層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)Human PIR ELISA Kit色素C-1(CYC1)ELISA試劑盒
	
	
		釀酒酵母層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)Human PITPNB ELISA Kit色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒
	
	
		鏈霉菌 (灰褐類群)脂質(zhì)運載蛋白1抗體Human PIGT ELISA Kit色素b561(cytb561)ELISA試劑盒
	
	
		天藍(lán)色鏈霉菌趨化因子抗體Human PIGS ELISA Kit絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA試劑盒
	
	
		產(chǎn)氨短桿菌低密度脂蛋白受體5樣蛋白抗體Human PIGZ ELISA Kit絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)ELISA試劑盒
	
	
		根瘤菌富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白3抗體Human PIH1D1 ELISA Kit膜表面球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒
	
	
		單色革蓋菌扁豆凝集素Human PIK3C2G ELISA Kit膜DNA抗體(cmDNA)ELISA試劑盒
	
	
		卷枝毛霉磷酸化富亮氨酸重復(fù)激酶2抗體Human IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) ELISA Kit角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒
傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)硝唑偶聯(lián)血藍(lán)蛋白穿山龍(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		三聚與雞卵白蛋白偶聯(lián)物穿心蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		神經(jīng)元特異性烯化酶抗原穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		Nogo-66 (1-40)船形烏頭(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		神經(jīng)肽 Y(1-36)垂盆草(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		神經(jīng)保護肽椿皮(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽慈溪麥冬皂苷AHuman
	
	
		土霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白次野鳶尾黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		土霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白甘草查爾(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。