使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴增緩沖液   10ul
4種dNTP混合物   各200umol/L
引物   各10~100pmol
模板DNA       0.1~2ug
   Taq DNA聚合酶   2.5u
Mg2+       1.5mmol/L
加雙或三蒸水至  100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 金魚造血器官壞死病毒(GFHNV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64357
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
	
	
		
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
	
	
		
PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
云芝驅(qū)動蛋白家族蛋白3抗體Human PRCC ELISA Kit血小板相關(guān)補體3(PAC3)ELISA試劑盒
	
	
		中生根瘤菌驅(qū)動蛋白2抗體Human PRKAR1A(Protein kinase cAMP-dependent type I regulatory subunit alpha) ELISA Kit血小板生長因子(PGF)ELISA試劑盒
	
	
		枯草芽孢桿菌KIAA1522蛋白抗體Human PRDM10 ELISA Kit血小板**素(TPO)ELISA試劑盒
	
	
		漢遜德巴利酵母離子通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體Human PRKAR1B ELISA Kit血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA試劑盒
	
	
		芽孢桿菌高分子量激肽原重鏈抗體Human PRDM15(PR domain zinc finger protein 15) ELISA Kit血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒
	
	
		毛栓孔菌通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體Human PRDM4 ELISA Kit血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA試劑盒
	
	
		貝倫格葡萄座腔菌梨生?;?/span>Kelch樣蛋白26抗體Human PRKD2 ELISA Kit血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒
	
	
		滑菇賴氨酸,天冬氨酸,谷氨酸,亮氨酸相關(guān)序列抗體Human PREB ELISA Kit血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒
	
	
		產(chǎn)黃青霉Kelch樣蛋白10抗體Human PRKCDBP ELISA Kit血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA試劑盒
	
	
		蠟樣芽孢桿菌Kelch樣蛋白11抗體Human PRKAR2B ELISA Kit血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA試劑盒
	
	
		彎孢菌Kelch樣蛋白3抗體Human LALBA(Alpha-lactalbumin) ELISA Kit血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒
	
	
		云芝Kelch樣蛋白14抗體Human PRELID1 ELISA Kit血纖蛋白原γ鏈(FGG)ELISA試劑盒
	
	
		短桿菌Kelch樣蛋白31抗體Human DHH(Desert hedgehog protein) ELISA Kit血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒
	
	
		CystofilobasidiumKelch樣蛋白32抗體Human PPP4R2 ELISA Kit血纖蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒
	
	
		致病擬桿菌電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體Human PRKG2 ELISA Kit血吸蟲(schistosoma)ELISA試劑盒
	
	
		糞腸球菌TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體Human PPPDE1 ELISA Kit血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒
金魚造血器官壞死病毒(GFHNV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)腺病 IgM Ⅲ型(間接法二步法)姜黃(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		腺病 IgG Ⅶ型(間接法二步法)姜黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
	
	
		腺病 IgM Ⅶ型(間接法二步法)姜(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		腺病 IgM Ⅺ型(間接法二步法)降二氫辣椒Human, Mouse
	
	
		大鼠褪黑素降香(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
	
	
		兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白膠蒼術(shù)甙,羧蒼術(shù)苷二鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
	
	
		小鼠癌胚抗原焦地黃苯乙甙A1Human
	
	
		人ω干擾素焦地黃苯乙甙B1Human, Mouse, Rat
	
	
		腺病 IgG Ⅺ型(間接法二步法)焦性沒食子(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。