使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號(hào):BH-P64321
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
嗜鹽四聯(lián)球菌磷酸化組蛋白H3抗體Human SCN10A ELISA Kit鮭魚補(bǔ)體蛋白3(C3)試劑盒
谷氨酸棒狀桿菌(黃色短桿菌)*磷酸化組蛋白H3抗體Human SCML2 ELISA Kit狗ELISA試劑盒
大腸埃希菌磷酸化組蛋白H3抗體Human SCARA5 ELISA Kit狗微管相關(guān)蛋白tau(MAPT)試劑盒
福山假絲酵母組蛋白去乙酰化酶5抗體Human SCN2B ELISA Kit狗氨基乙酰酸,delta-脫水酶(ALAD)試劑盒
鴨疫里氏桿菌A型流感病H5N1凝集素Human SCARF1 ELISA Kit狗15 - 酮基-13,14-二氫前列腺素F2α(15-keto-13,14-dihydro-PGF2α)試劑盒
橙色桿狀菌人巨病UL49蛋白抗體Human MUC15(Mucin-15) ELISA KitELISA試劑盒
褐球固氮菌*肝核因子1β/HNF-1β抗體Human SCCPDH ELISA Kit脂聯(lián)素(ADP)試劑盒
埃切畢赤酵母HHLA3蛋白抗體Human SART1 ELISA Kit胃泌素(Gastrin)試劑盒
球孢白僵菌HHIP樣蛋白2抗體Human SCEL ELISA Kit胃動(dòng)素(MTL)試劑盒
多分枝靈芝A型流感病H3N2-M2蛋白抗體Human SART3 ELISA Kit白蛋白(Albumin)試劑盒
植物乳桿菌HSH2D抗體Human SAT2 ELISA Kit5羥色(5-HT)試劑盒
美澳型核果褐腐病菌水蛭素抗體Human SAMM50 ELISA Kit鵝ELISA試劑盒
犁黑輪斑交鏈孢霉白抗原A抗體Human SASS6 ELISA Kit鵝維生素D3(VD3)試劑盒
季也蒙邁耶氏酵母人瘤病16型E7抗體Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit鵝降鈣素(CT)試劑盒
空腸彎曲桿菌人類狀瘤病58 E6蛋白抗體Human SATB1 ELISA Kit鵝骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)試劑盒
宇佐美曲霉人類狀瘤病16抗體Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit鵝鈣結(jié)合蛋白(CR)試劑盒
牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)味覺感受器蛋白T2R38抗體卡鉑 CARBOPLATIN(RG)Human
5色氨羥化酶2抗體卡鉑 CARBOPLATIN(RG)Human, Mouse, Rat
硫氧還蛋白11抗體CARBOLINE-1-PROPIONIC ACID, B-(SH)Human
微管蛋白4α抗體CARBOLINE-1-PROPIONIC ACID, B-(SH)Human, Mouse
動(dòng)力蛋白輕鏈CARBENOXOLONE(RG)Human
腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2抗體鼠尾草酚 CARNOSOL(P)Human, Mouse, Rat
血小板**素受體抗體鼠尾草酚 CARNOSOL(P)Human
跨膜絲氨蛋白酶5抗體鼠尾草酚 CARNOSOL(P)Human, Mouse
脫中胚蛋白抗體鼠尾草酚 CARNOSOL(P)(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。