使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 乙型流感病毒(IBV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64233
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與???守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
艾登短芽孢桿菌半乳糖神經(jīng)酰酶抗體Human XPA ELISA Kit雞白介素8(IL-8)試劑盒
節(jié)桿菌磷酸化葡萄糖合成酶1抗體Human YEATS2 ELISA Kit雞白介素6受體(IL-6R)試劑盒
雷州灣芽孢桿菌半乳糖凝集素3抗體Human XPNPEP1 ELISA Kit雞白介素6(IL-6)試劑盒
亮白曲霉生長因子受體結(jié)合蛋白7抗體Human YOD1 ELISA Kit雞白介素4(IL-4)試劑盒
鞘氨單胞菌屬糖基轉(zhuǎn)移酶1結(jié)構(gòu)域1抗體Human YES1 ELISA Kit雞白介素3(IL-3)試劑盒
變異居白蟻菌G蛋白偶聯(lián)受體LGR7蛋白抗體Human XRCC5/Ku80(X-ray repair cross-complementing protein 5) ELISA Kit雞白介素2(IL-2)試劑盒
干酪乳桿菌G蛋白偶聯(lián)受體MRGX2蛋白抗體Human XRCC4 ELISA Kit雞白介素1β(IL-1β)試劑盒
少根根霉東京變種G蛋白偶聯(lián)受體RDC1蛋白抗體Human XRCC2 ELISA Kit雞白介素18(IL-18)試劑盒
類阿達(dá)青霉G蛋白偶聯(lián)受體TAS1R1蛋白抗體Human PDE1C(Calcium/calmodulin-dependent 3′,5′-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1C) ELISA Kit雞白介素17(IL-17)試劑盒
膠孢G蛋白偶聯(lián)受體TGR7蛋白抗體Human XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis ) ELISA Kit雞白介素15(IL-15)試劑盒
田菁根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR157蛋白抗體Human XRN1 ELISA Kit雞白介素12(IL-12/70)試劑盒
橙黃色擲孢酵母G蛋白偶聯(lián)受體GPR176蛋白抗體Human XRN2 ELISA Kit雞白介素10(IL-10)試劑盒
嗜糖黃桿菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR10蛋白抗體Human MTF1(Metal regulatory transcription factor 1) ELISA Kit雞白介素1(IL-1)試劑盒
皺褶假絲酵母G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體Human XIRP2 ELISA Kit雞γ干擾素(IFN-γ)試劑盒
托魯斯山鏈霉菌G蛋白偶聯(lián)受體EX33蛋白抗體Human XYLT1 ELISA Kit雞β內(nèi)酰酶(β-lactamase)試劑盒
鏈卵菌屬G蛋白偶聯(lián)受體GPR102蛋白抗體Human YME1L1 ELISA Kit雞β干擾素(IFN-β/IFNB)試劑盒
乙型流感病毒(IBV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
同源盒因HOXA3蛋白抗體Phospho-Smad3 (Ser423/425) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體IgG
同源盒因HOXA4蛋白抗體Smad4/FITC 熒光素標(biāo)記Smad4抗體IgG
設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。