PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號(hào):BH-P64224
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。

使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
產(chǎn)色鏈霉菌富含亮氨酸跨膜纖連蛋白1抗體Human ZNF571 ELISA Kit雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)試劑盒
三葉草根瘤菌富含亮氨酸跨膜纖連蛋白2抗體Human ZNF346 ELISA Kit雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒
馬賽菌富含亮氨酸跨膜纖連蛋白3抗體Human ZNF34 ELISA Kit雞脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)試劑盒
微扁沃利雅炭皮菌牛纖維蛋白原抗體Human ZNF446 ELISA Kit雞脂多糖/內(nèi)素(LPS)試劑盒
異常漢遜酵母異常變種FAM172A蛋白抗體Human RBP1(Retinol-binding protein 1) ELISA Kit雞脂蛋白脂酶(LPL)試劑盒
草木樨中華根瘤菌磷酸化粘著斑激酶抗體Human ZNF557 ELISA Kit雞孕/孕酮(PROG)試劑盒
茶新菇磷酸化粘著斑激酶抗體Human ZNF35 ELISA Kit雞游離脂肪酸(FFA)試劑盒
乙假絲酵母磷酸化脆性組氨酸三聯(lián)體抗體Human ZNF593 ELISA Kit雞抑制素B(INH-B)試劑盒
枯草芽孢桿菌磷酸化FRA-1蛋白抗體Human ZNF571 ELISA Kit雞抑制素A(INH-A)試劑盒
枯草芽孢桿菌枯草亞種磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Human ZNF460 ELISA Kit雞乙酰輔酶A羧化酶α(ACACA)試劑盒
西蕃蓮莖基腐病磷酸化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體Human ZNF470 ELISA Kit雞胰高血糖素(GC)試劑盒
多根硬皮馬勃磷酸化叉頭蛋白家族抗體Human ZNF48 ELISA Kit雞胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)試劑盒
炭疽芽胞桿菌磷酸化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF486 ELISA Kit雞胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)試劑盒
谷氨酸棒桿菌Ⅲ型磷酸化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF483 ELISA Kit雞胰島素(INS)試劑盒
果生鏈核盤(pán)菌磷酸化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF488 ELISA Kit雞一氧化氮(NO)試劑盒
玉蜀黍平臍蠕孢*磷酸化叉頭蛋白家族1抗體Human ZNF394 ELISA Kit雞延伸因子Tu,線粒體(TUFM)試劑盒
禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
人類皰疹病8抗體SLC33A1/FITC 熒光素標(biāo)記乙酰輔酶A轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體IgG
磷酸化熱休克蛋白27抗體SLC34A2/NaPi-2b/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體IgG