PCR反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 大豆源性成分檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
規(guī)格: 48T 0.2PCR管
貨號:BH-P64206
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

使用及效果:
標準的PCR反應體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
棘孢小單孢菌外基質蛋白FRAS1抗體Human CTDSPL (CTD small phosphatase-like protein) ELISA KIT??娎展芤种莆镔|/抗繆勒管(AMH)試劑盒
楊生盤二孢富馬酸水合酶抗體Human CTPS1 (CTP synthase 1) ELISA KIT牛球蛋白G-2(IgG-2)試劑盒
地衣芽孢桿菌成纖維生長因子21抗體Human SLC14A1(Urea transporter 1) ELISA Kit牛球蛋白G-1(IgG-1)試劑盒
類高加索酸奶乳桿菌核仁纖維蛋白抗體Human CRIM1 (Cysteine-rich motor neuron 1 protein) ELISA KIT牛球蛋白G(IgG)試劑盒
糙皮側耳鐵蛋白輕鏈抗體Human CLEC12A (C-type lectin domain family 12 member A) ELISA KIT牛球蛋白E(IgE)試劑盒
慢生海桿狀菌*肝核因子3抗體Human CYHR1 (Cysteine and histidine-rich protein 1) ELISA KIT牛球蛋白A(IgA)試劑盒
卷枝毛霉詹森變型果糖1,6-二磷酸酯酶抗體Human CUBN(Cubilin) ELISA Kit牛卵泡抑素(FST)試劑盒
黃赭色鏈霉菌6磷酸果糖激酶抗體Human CRIP1 (Cysteine-rich protein 1) ELISA KIT牛磷酸烯式酮酸羧激酶(PCK)試劑盒
阪崎腸桿菌肌肉果糖二磷酸酶抗體Human CUEDC1 (CUE domain-containing protein 1) ELISA KIT牛磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒
羅爾斯通氏菌纖維蛋白原γ鏈抗體Human CRISPLD1 (Cysteine-rich secretory protein LCCL domain-containing 1) ELISA KIT牛磷酸果糖激酶(PFK)試劑盒
釀酒酵母纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B)Human CPXCR1 (CPX chromosomal region candidate gene 1 protein) ELISA KIT牛磷酸甘油酸酯激酶2(PGK2)試劑盒
巴斯德畢赤酵母原癌基因c FGR抗體Human CDRT4 (CMT1A duplicated region transcript 4 protein homolog) ELISA KIT??谔阋?FMDV)抗體(IgM)試劑盒
糞產(chǎn)堿菌肢體畸形相關蛋白FHOD1抗體Human CFDP1 (Craniofacial development protein 1) ELISA KIT??扇苄訡D86(B7-2/sCD86)試劑盒
漢遜德巴利酵母磷酸化肢體畸形相關蛋白FHOD1抗體Human CRAMP1 (Protein cramped-like) ELISA KIT??扇苄訡D8(sCD8)試劑盒
釀酒酵母纖連蛋白2抗體Human CEP85 (Centrosomal protein of 85 kDa) ELISA KIT牛試劑盒
無色桿菌纖連蛋白7抗體Human FOXC2(Forkhead box protein C2) ELISA Kit牛金屬硫蛋白(MT)試劑盒
大豆源性成分檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
肝核因子1α抗體Shadow/SPRN/FITC 熒光素標記新朊蛋白/朊蛋白相關蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白抗體IgG
缺氧誘導因子1β /HIF-1β抗體Shank1/FITC 熒光素標記shank-1抗體IgG