使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 貓?jiān)葱猿煞謾z測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>
規(guī)格: 48T 0.2PCR管
貨號(hào):BH-P64199
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)??則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
需鈉弧菌上皮特異性轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human DSCAML1 (Down syndrome cell adhesion molecule-like protein 1 homolog) ELISA KIT犬B瘤因子2(Bcl-2)試劑盒
油菜菌核病菌內(nèi)皮素2抗體Human EDA2R (Tumor necrosis factor receptor superfamily member 27) ELISA KIT犬B-趨化因子1(BLC-1/CXCL13)試劑盒
枯草芽孢桿菌內(nèi)皮受體蛋白酪氨酸激酶B3抗體Human DPP9(Dipeptidyl peptidase 9) ELISA Kit犬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒
圍小叢殼菌軟骨外胚層發(fā)育**相關(guān)蛋白抗體Human DYDC2 (DPY30 domain-containing protein 2) ELISA KIT犬5羥色(5-HT)試劑盒
平菇—法無(wú)孢髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體Human EPS8L3 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3) ELISA KIT犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)試劑盒
枯草芽孢桿菌雌受體α抗體Human EPC1 (Enhancer of polycomb homolog 1) ELISA KIT犬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)試劑盒
香菇內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體Human ERAS (GTPase ERas) ELISA KIT犬25羥基維生素D3(25 HVD3)試劑盒
美澳型核果褐腐病菌鋅指蛋白521抗體Human ENOSF1 (Mitochondrial enolase superfamily member 1) ELISA KIT犬2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)試劑盒
檸檬色小單孢菌大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) ELISA Kit犬17羥孕酮(17-OHP)試劑盒
Sphingobacterium composti植物延展素-βHuman TYROBP(TYRO protein tyrosine kinase-binding protein) ELISA Kit牛ELISA試劑盒
黃桿菌內(nèi)皮素-1抗體Human ECHDC1 (Ethylmalonyl-CoA decarboxylase) ELISA KIT牛組(HIS)試劑盒
炭疽芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激酶4抗體Human EVPL (Envoplakin) ELISA KIT牛總蛋白S(TPS)試劑盒
盤孢屬埃茲蛋白抗體Human EPT1 (Ethanolaminephosphotransferase 1) ELISA KIT牛轉(zhuǎn)錄因子P65(RELA)試劑盒
孢小克銀漢霉原變種轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human DUSP3 (Dual specificity protein phosphatase 3)ELISA KIT牛轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)試劑盒
枯草芽孢桿菌內(nèi)皮素-1單克隆抗體Human EOMES (Eomesodermin homolog) ELISA KIT牛轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)試劑盒
泰國(guó)鹽球菌腸道病71型抗體Human ENAM (Enamelin) ELISA KIT牛主要組織相容性復(fù)合體(MHC/BoLA)試劑盒
貓?jiān)葱猿煞謾z測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>
短鏈L-3羥烷輔酶A脫氫酶抗體Selenoprotein W/FITC 熒光素標(biāo)記硒蛋白W抗體IgG
組蛋白去乙?;?/span>9抗體Sema3A/FITC 熒光素標(biāo)記臂板蛋白3A抗體IgG
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。