PCR反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 阪崎腸桿菌檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
規(guī)格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
貨號:BH-P64174
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

使用及效果:
標準的PCR反應體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
葡萄座腔菌屬磷酸化HER2受體抗體Human IVL(Involucrin) ELISA Kit人G蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)試劑盒
糙孢籃狀菌磷酸化HER2受體抗體Human NSMAF (Protein FAN) ELISA KIT人GTP酶NRas(NRAS)試劑盒
綠色木霉=木素木霉磷酸化HER3受體抗體Human NCEH1 (Neutral cholesterol ester hydrolase 1) ELISA KIT人Gremlin-1蛋白(GREM1)試劑盒
堅強芽孢桿菌磷酸化HER4抗體Human PILRB(Paired immunoglobulin-like type 2 receptor beta) ELISA Kit人GDP解離抑制因子2(GdI2)試劑盒
扣囊復膜孢酵母磷酸化HER4抗體Human NPTXR(Neuronal pentraxin receptor) ELISA Kit人GAD/IA2自身抗體試劑盒
球形芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體Human NCF1 (Neutrophil cytosol factor 1) ELISA KIT人G1/S特異性周期蛋白E1(CCNE1)試劑盒
地中海擬無枝酸菌磷酸化轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體Human MAP2(Microtubule-associated protein 2) ELISA Kit人F-肌動蛋白(F-actin)試劑盒
熱帶假絲酵母真核肽鏈釋放因子1抗體Human NPSR1 (Neuropeptide S receptor) ELISA KIT人FOS 樣抗原2(FOSL2)試劑盒
出芽短梗霉真核肽鏈釋放因子3a抗體Human NPFF (Pro-FMRFamide-related neuropeptide FF) ELISA KIT人FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt-3L)試劑盒
空腸彎曲桿菌表皮生長因子受體底物15抗體Human GAP43(Neuromodulin) ELISA Kit人FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)試劑盒
佛雷德里克斯堡假單胞菌內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN1抗體Human NETO1 (Neuropilin and tolloid-like protein 1) ELISA KIT人Fc受體樣蛋白3(FCRL3)試劑盒
Aurantimonas coralicida內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體Human NLK (Serine/threonine-protein kinase NLK) ELISA KIT人FAM172A蛋白(FAM172A)試劑盒
疏水戈登氏菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白ERGI3抗體Human NSF (Vesicle-fusing ATPase) ELISA KIT人E選擇素(E-Selectin/CD62E)試劑盒
熒光假單胞菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化物蛋白Ero1-Lα抗體Human NRSN1 (Neurensin-1) ELISA KIT人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)試劑盒
濟州單胞菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體Human NANP (N-acylneuraminate-9-phosphatase) ELISA KIT人ES1蛋白同系物,線粒體(C21orf33/HES1/KNPI)試劑盒
黑根霉內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp72抗體Human MYNN (Myoneurin) ELISA KIT人Ephrin-B2(EFNB2)試劑盒
阪崎腸桿菌檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)組織蛋白酶D抗體Nodal同源物(NODAL)檢測試劑盒NODAL ELISA Kit
組織蛋白酶H抗體NADH脫氫酶1(ND1)檢測試劑盒ND1 ELISA Kit
磷化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體Misato同源物1(MSTO1)檢測試劑盒MSTO1 ELISA Kit
磷化半胱氨蛋白酶9抗體Mdm2p53結(jié)合蛋白同源物(MDM2)檢測試劑盒MDM2 ELISA Kit
磷化半胱氨蛋白酶9抗體M2-型丙激酶(PKM2)檢測試劑盒PKM2 ELISA Kit
磷化β 連環(huán)素蛋白抗體L-型電壓依賴性鈣離子通道α1D亞(CACNα1D)檢測試劑盒CACNα1D ELISA Kit
磷化β 連環(huán)素蛋白抗體L-型電壓依賴鈣離子通道α1S亞(CACNα1S)檢測試劑盒CACNα1S ELISA Kit
磷化β 連環(huán)素蛋白抗體L-型電壓依賴鈣離子通道α1F亞(CACNα1F)檢測試劑盒CACNα1F ELISA Kit
磷化β 連環(huán)素蛋白抗體L-型電壓依賴鈣離子通道α1C亞(CACNα1C)檢測試劑盒CACNα1C ELISA Kit
綠色熒光蛋白抗體RelB /FITC 熒光素標記核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體IgG
G蛋白通路抑制蛋白1抗體Regucalcin/SMP30/Rgn/FITC 熒光素標記衰老標記蛋白30抗體IgG