PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 轉(zhuǎn)基因玉米品系MON89034檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)
規(guī)格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
貨號(hào):BH-P64140
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
金針菇組織蛋白酶G抗體Human RAG1(V(D)J recombination-activating protein 1) ELISA Kit人法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1(FDFT1)試劑盒
解脂鹽紅菌激分子B7-1蛋白抗體Human DUT(Deoxyuridine 5′-triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial) ELISA Kit人法尼X受體(FXR)試劑盒
鴨疫里氏桿菌1號(hào)染色體開放閱讀框145抗體Human SCARB1(Scavenger receptor class B member 1) ELISA Kit人二?;视?DAG/DG)試劑盒
南類芽孢桿菌20號(hào)染色體開放閱讀框186抗體Human NFATC1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) ELISA Kit人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)試劑盒
猬木霉角蛋白7抗體Human HTN3(Histatin-3) ELISA Kit人二氫嘧啶脫氫酶[NADP+](DPYD)試劑盒
溶血不動(dòng)桿菌基因型4間隙連接蛋白26抗體Human SRD5A1(3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1) ELISA Kit人二氫嘧啶酶樣3(DPYSL3)試劑盒
貝倫格葡萄座腔菌膜輔蛋白抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) ELISA Kit人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)試劑盒
鴨疫里氏桿菌F肌動(dòng)蛋白α1亞基抗體Human MADCAM1(Mucosal addressin cell adhesion molecule 1) ELISA Kit人二羥基賴正己氨酸(DHLNL)試劑盒
抗生鏈霉菌CD8抗體Human NEO1(Neogenin) ELISA Kit人二磷酸腺苷(ADP)試劑盒
黃桿菌CD8抗體Human NAIP(Baculoviral IAP repeat-containing protein 1) ELISA Kit人二磷酸尿核苷葡糖酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4(UGT2B4)試劑盒
小孢根霉原變種表面趨化因子受體2抗體Human PACRG(Parkin coregulated gene protein) ELISA Kit人二氧化酶(DAO)試劑盒
中慢生根瘤菌胱抑素B/半胱氨酸蛋白酶抑制劑B抗體Human CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1) ELISA Kit人兒茶酚抑素試劑盒
溜曲霉趨化素樣蛋白抗體Human JUP(Junction plakoglobin) ELISA Kit人兒茶酚(CA)試劑盒
多孢木霉角蛋白20抗體Human CFL1(Cofilin-1) ELISA Kit人鵝膏蕈堿試劑盒
蘇云金芽胞桿菌鈣激活的中性蛋白酶2抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) ELISA Kit人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)試劑盒
臭曲霉CD45RO抗體Human IZUMO1(Izumo sperm-egg fusion protein 1) ELISA Kit人多效生長因子(PTN)試劑盒
轉(zhuǎn)基因玉米品系MON89034檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)轉(zhuǎn)錄因子LBX1抗體苦參新F Pulchinenoside B
神經(jīng)特異性轉(zhuǎn)錄因子LDB1抗體苦地?。?biāo)準(zhǔn)品) V
白化學(xué)吸引素2抗體苦鬼臼素 Mogroside IVa
LHX5蛋白抗體苦楝皮(標(biāo)準(zhǔn)品) isomogroside V
單絲氨蛋白激酶1+2抗體苦木(標(biāo)準(zhǔn)品) Sinomenine HCl
LIN7C蛋白抗體苦蘇花皂苷C Sinomenine
富含亮氨重復(fù)序列Nogo受體反應(yīng)蛋白4抗體苦杏仁(標(biāo)準(zhǔn)品) DNA.Na
富含亮氨α2糖蛋白抗體苦玄參(標(biāo)準(zhǔn)品) RNA
腦特異性磷脂磷酶樣蛋白1抗體苦玄參苷IA(標(biāo)準(zhǔn)品) Uridine-5-diphosphoglucose disodium salt
轉(zhuǎn)錄因子Gli2抗體pRb/p105-Rb /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化成視網(wǎng)膜瘤抑癌蛋白抗體IgG
轉(zhuǎn)錄因子Gli3抗體PRCP/FITC 熒光素標(biāo)記脯氨酰羧肽酶抗體IgG