PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: PMI基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>
規(guī)格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
貨號(hào):BH-P64129
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。

使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
地衣芽孢桿菌20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框141抗體Human ANGPTL2(Angiopoietin-related protein 2) ELISA Kit人胱抑素F(CST7)試劑盒
馬闊里類芽孢桿菌20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框160抗體Human OGDH(2-oxoglutaRate dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit人胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)試劑盒
扣囊復(fù)膜孢酵母親環(huán)蛋白(親環(huán)素)40抗體Human CCR4(C-C chemokine receptor type 4) ELISA Kit人胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)試劑盒
Bacillus aryabhattai T調(diào)控相關(guān)蛋白抗體Human IKBKB(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta) ELISA Kit人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)試劑盒
熱吸水鏈霉菌突觸后蛋白CRIPT抗體Human ROMO1(Reactive oxygen species modulator 1) ELISA Kit人胱天蛋白酶9(Casp-9)試劑盒
米曲霉鈣粘附蛋白8抗體Human THRA(Thyroid hormone receptor alpha) ELISA Kit人胱天蛋白酶8(Casp-8)試劑盒
Bacillus tequilensis6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框174抗體Human FH(FumaRate hydRatase, mitochondrial) ELISA Kit人胱天蛋白酶-5(CASP5)試劑盒
科氏葡萄球菌科氏亞種6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框150抗體Human GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) ELISA Kit人胱天蛋白酶3(Casp-3)試劑盒
水生哈薩克斯坦酵母X染色體開(kāi)放閱讀框56抗體Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA Kit人胱天蛋白酶12(Casp-12)試劑盒
美味牛肝菌9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框152抗體Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA Kit人胱天蛋白酶10(CASP10)試劑盒
大腸埃希氏菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框58抗體Human IDE(Insulin-degrading enzyme) ELISA Kit人胱天蛋白酶1(Casp-1)試劑盒
爪哇根霉接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) ELISA Kit人胱硫β-合酶(CBS)試劑盒
鏈格孢CD24抗體Human KLK7(Kallikrein-7) ELISA Kit人胍基丁脲水解酶/凝集酶(AGMAT)試劑盒
枯草芽胞桿菌接觸蛋白相關(guān)蛋白3抗體Human FPR2(N-formyl peptide receptor 2) ELISA Kit人瓜氨酸試劑盒
囊毛霉CD24抗體Human ACAN(Aggrecan core protein) ELISA Kit人骨織素(Ostn)試劑盒
枯草芽孢桿菌限局性核因子3抗體Human 12-HETE(12-Hydroxyeicosatetraenoic Acid) ELISA Kit人骨形成蛋白6(BMP-6)試劑盒
PMI基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)ǎ?/span>轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體銀杏葉提取物#1 Ginkgo (Ginkgo biloba) Leaf Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)Human
Rab溶酶體相互作用蛋白樣2抗體藤黃果提取物 #6 Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框52抗體藤黃果提取物 #5 Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE)Human
梅克爾憩室綜合征相關(guān)蛋白5抗體藤黃果提取物 #4 Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)Human
β1,3-N-乙酰糖轉(zhuǎn)移酶抗體藤黃果提取物 #3 Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit Extract #3 BXL(REQUEST QUOTE)Human
RAB3-GTP酶激活蛋白催化亞單位1抗體藤黃果提取物 #2 Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit Extract #2 BXL(REQUEST QUOTE)Human
RAB3-GTP酶激活蛋白催化亞單位2抗體藤黃果提取物 #1 Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
維誘導(dǎo)蛋白1抗體Fadogia (Fadogia agrestis) Root Stem Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
環(huán)指蛋白13抗體Fadogia (Fadogia agrestis) Root Stem Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白2抗體PMP2 /FITC 熒光素標(biāo)記周?chē)窠?jīng)髓鞘蛋白2抗體IgG
G蛋白α亞單位蛋白Q抗體PMP-22/FITC 熒光素標(biāo)記外周髓鞘蛋白-22IgG