PCR反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
產品參數(shù):
產品名稱: 耶氏肺孢子蟲染料法熒光定量PCR試劑盒
規(guī)格: 50次
貨號:BH-P63401
公司產品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

使用及效果:
標準的PCR反應體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
L-腎上腺素(標準品)英文名稱: Sumatriptan succinate 順氨鉑耐藥相關蛋白9抗體包裝5g
L-絲氨酸(標準品)英文名稱: Streptomycin Sulphate22號染色體開放閱讀框40抗體包裝1g
L-天門冬氨酸(標準品)英文名稱: Streptomycin Sulphate嗜酸粒趨化蛋白3抗體包裝1g
L-巖藻糖(標準品)英文名稱: Dihydrostreptomycin Sulphate21號染色體開放閱讀框33抗體包裝250mg
L-異亮氨酸(標準品)英文名稱: Diclofenac sodium角蛋白15抗體包裝5ml
Lenalidomide(標準品)英文名稱: Diclofenac sodium角蛋白14抗體包裝1g
Letrozole(標準品)英文名稱: Gabapentin神經(jīng)NB3特定蛋白抗體包裝1g
Levonorgestrel(標準品)英文名稱: Gabapentin促胃泌素受體抗體包裝5g
Loperamide HCl(標準品)英文名稱: Domperidone單克隆抗體包裝1g
Losartan Potassium英文名稱: Domperidone2號染色體開放閱讀框72抗體包裝5g
m-酚-4-磺酸銨(聚酚磺雜質)(標準品)英文名稱: Niclosamide間粘附分子3抗體包裝1g
m-酚-4,6-二磺酸銨 (聚酚磺雜質)(標準品...英文名稱: Niclosamide染色質結合蛋白Cbx8抗體包裝1g
m-酚-6-磺酸銨(聚酚磺雜質)(標準品)英文名稱: Ciprofloxacin降鈣素抗體包裝25g
MB1120-S英文名稱: Ciprofloxacin降鈣素基因相關肽1型受體抗體包裝5g
Medroxyprogesterone acetate...英文名稱: FamciclovirCD19抗體包裝500mg
耶氏肺孢子蟲染料法熒光定量PCR試劑盒NFRKB Antibody克勞氏芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus clausii
NFYA Antibody韓國假單胞菌拉丁屬名: Pseudomonas koreensis
NFYB AntibodyEnterobacter cloacae subsp. dissolvens注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或,非藥用,非食用
NFYB Antibody大腸埃希菌拉丁屬名: coli
NFYC Antibody球毛殼霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或,非藥用,非食用
NHLH1 Antibody甘肅姜成林氏菌拉丁屬名: Jiangella gansuensis
NID1 Antibody桿狀毛霉拉丁屬名: Mucor bacilliformis
NIBAN2 Antibody米曲霉拉丁屬名: Aspergillus oryzae
NHLH1 Antibody桿菌拉丁屬名: Propionibacterium acidipropionici
NKTR Antibody鼠傷寒沙門氏菌拉丁屬名: typhimurium