PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 試對(duì)蝦桿狀病毒染料法熒光定量PCR劑盒
規(guī)格: 50次
貨號(hào):BH-P63346
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。

使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
毒蕈堿型膽堿受體M3(CHRM3)檢測(cè)試劑盒英文名稱:CHRM3 ELISA Kit毛細(xì)管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體包裝100g
毒蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)檢測(cè)試劑盒英文名稱:CHRM2 ELISA Kit肌鈣集蛋白/收鈣素抗體包裝25g
凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)檢測(cè)試劑盒英文名稱:APAF1 ELISA Kit鈣結(jié)合蛋白樣39抗體包裝5g
淀粉樣前體蛋白(APP)檢測(cè)試劑盒英文名稱:APP ELISA Kit癌胚抗原相關(guān)粘附分子3抗體包裝1ml
淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1(APLP1)檢測(cè)試劑盒英文名稱:APLP1 ELISA Kit20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框31抗體包裝1g
淀粉樣蛋白β1-42(Aβ1-42)檢測(cè)試劑盒英文名稱:Aβ1-42 ELISA Kit成簇相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
淀粉樣蛋白β1-40(Aβ1-40)檢測(cè)試劑盒英文名稱:Aβ1-40 ELISA Kit腫瘤/抗原2抗體包裝5g
碘腺原氨酸脫碘酶Ⅲ(DIO3)檢測(cè)試劑盒英文名稱:DIO3 ELISA Kit腫瘤/抗原1B包裝1g
碘腺原氨酸脫碘酶Ⅱ(DIO2)檢測(cè)試劑盒英文名稱:DIO2 ELISA Kit皮膚T瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達(dá)抗原6)包裝5g
抵抗素(RETN)檢測(cè)試劑盒英文名稱:RETN ELISA Kit腫瘤/抗原3抗體包裝10mg
低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)檢測(cè)試劑盒英文名稱:HIF2α ELISA Kit腦多巴神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體包裝1g
低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)檢測(cè)試劑盒英文名稱:HIF1α ELISA Kit鈣依賴分泌激活蛋白2/自閉癥的相關(guān)蛋白抗體包裝5g
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)檢測(cè)試劑盒英文名稱:LRP1 ELISA Kit膽囊收縮素A受體抗體包裝100mg
低密度脂蛋白受體銜接蛋白1(LDLRAP1)檢測(cè)試劑盒英文名稱:LDLRAP1 ELISA Kit小腦肽3抗體包裝1g
低密度脂蛋白受體(LDLR)檢測(cè)試劑盒英文名稱:LDLR ELISA Kit周期素依賴性激酶樣5抗體包裝1g
試對(duì)蝦桿狀病毒染料法熒光定量PCR劑盒ITPKA Antibody細(xì)麗外擔(dān)菌拉丁屬名: Exobasidium gracile
ITGAD Antibody核盤(pán)菌用途: 教學(xué)科研
ITIH2 AntibodyPhaeobotryon拉丁屬名: Phaeobotryon rhois
ITPK1 AntibodyMicrobacterium halotolerans注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或,非藥用,非食用
ITPKC Antibody釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
JAK2 Antibody黑曲霉拉丁屬名: Aspergillus niger
ITPKB Antibody巧克力糖霉菌拉丁屬名: Glycomyces chocolcotum
JAK1 Antibody黃曲霉拉丁屬名: Aspergillus flavus
JAK2 Antibody冠突曲霉拉丁屬名: Aspergillus cristatus
JAKMIP2 Antibody鞘氨單胞菌(加詞待譯)注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或,非藥用,非食用