PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒
規(guī)格: 50次
貨號:BH-P63254
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:DNA提取試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
紅細(xì)胞**素受體(EPOR)檢測試劑盒英文名稱:EPOR ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白1抗體包裝10MG
紅細(xì)胞**素(EPO)檢測試劑盒英文名稱:EPO ELISA Kitβ淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體包裝1g
橫紋肌輔肌動蛋白α(sm Actinin-α)檢測試劑盒英文名稱:sm Actinin-α ELISA Kit腺瘤肉調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)檢測試劑盒英文名稱:MC Ab ELISA Kit銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體包裝5g
黑色素瘤(Melanoma)檢測試劑盒英文名稱:Melanoma ELISA Kit通道蛋白-7抗體包裝1g
核轉(zhuǎn)錄因子kBP65(NFkBP65)檢測試劑盒英文名稱:NFkBP65 ELISA Kit谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體包裝5g
核轉(zhuǎn)錄因子1(AP-1)檢測試劑盒英文名稱:AP-1 ELISA Kitp21活化蛋白激酶ARHG7抗體包裝200mg
核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)檢測試劑盒英文名稱:NF-κB p65 ELISA Kit磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體包裝5g
核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)檢測試劑盒英文名稱:NF-κB p65 ELISA Kit2-氨基乙硫雙加氧酶抗體包裝100g
核因子κB受體活化因子配基(RANKL)檢測試劑盒英文名稱:RANKL ELISA Kit血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體包裝25g
核因子κB受體活化劑配體(RANKL)檢測試劑盒英文名稱:RANKL ELISA Kit腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體包裝5g
核因子κB(NF-κB)檢測試劑盒英文名稱:NF-κB ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶19抗體包裝100g
核因子κB(NF-Kb)檢測試劑盒英文名稱:NF-Kb ELISA Kit原癌基因AF4蛋白抗體包裝25g
核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)檢測試劑盒英文名稱:Nrf2 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白抗體包裝500g
含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)檢測試劑盒英文名稱:Tie-2 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣2蛋白抗體包裝10g
T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒CPE Antibody假單胞菌用途: 微生物肥料
CPE Antibody豇豆慢生根瘤菌用途: 與金合歡、黑荊相思樹共生固氮
CPN1 Antibody拉考夫梅奇酵母 拉丁屬名: Metschnikowia reukaufii
CPA5 Antibody假諾卡氏菌拉丁屬名: Pseudonocardia rhizophila
CPNE8 Antibody木霉屬拉丁屬名: Trichoderma sp.
CPNE8 Antibody枯斑擬盤多毛孢注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或,非藥用,非食用
CR2 Antibody野油菜黃單胞菌拉丁屬名: Xanthomonas campestris
CPN2 Antibody柯奈尼亞小單孢菌拉丁屬名: Micromonospora chokoriensis
CR1 Antibody黃桿菌拉丁屬名: Flavobacterium urumqiense
CRABP2 Antibody膝形假單胞菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或,非藥用,非食用