PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 非凍型尿液DNA保存液
規(guī)格: 250 mL
貨號(hào):BH-P63238
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:DNA提取試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
蘋果酸脫氫酶(MDH)檢測(cè)試劑盒英文名稱:MDH ELISA Kit通道蛋白-2抗體包裝25g
嘌呤核苷酸磷酸化酶(PNP)檢測(cè)試劑盒英文名稱:PNP ELISA Kit血管緊張素原抗體包裝10MG
皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)檢測(cè)試劑盒英文名稱:CORT ELISA Kit雄受體抗體包裝10MG
皮質(zhì)醇(Cortisol)檢測(cè)試劑盒英文名稱:Cortisol ELISA Kit死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱酸蛋白酶激活抑制劑)包裝25g
胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)檢測(cè)試劑盒英文名稱:M30 ELISA Kit軸蛋白1抗體包裝5g
膀胱腫瘤抗原(BTA)檢測(cè)試劑盒英文名稱:BTA ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白9B抗體包裝25ml
牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)檢測(cè)試劑盒英文名稱:CIAP ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白12抗體包裝5ml
凝血因子XIII B(F13B)檢測(cè)試劑盒英文名稱:F13B ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白13抗體包裝25g
凝血因子XIII A1(F13A1)檢測(cè)試劑盒英文名稱:F13A1 ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)檢測(cè)試劑盒英文名稱:F8aLC ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶4型抗體包裝100mg
凝血因子Ⅻ(FⅫ)檢測(cè)試劑盒英文名稱:FⅫ ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝25g
凝血因子Ⅺ(FⅪ)檢測(cè)試劑盒英文名稱:FⅪ ELISA Kit磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g
凝血因子Ⅹ(FⅩ)檢測(cè)試劑盒英文名稱:FⅩ ELISA Kit絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR抗體包裝10g
凝血因子Ⅸ(FⅨ)檢測(cè)試劑盒英文名稱:FⅨ ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶18抗體包裝250g
凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)檢測(cè)試劑盒英文名稱:FⅧ-Ag ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體包裝50g
非凍型尿液DNA保存液CHAF1B Antibody盤長(zhǎng)孢狀盤孢注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或,非藥用,非食用
CHD1L Antibody雞腿菇2注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或,非藥用,非食用
CHEK1 Antibody鏈格孢注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或,非藥用,非食用
CHML Antibody淡青鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces glaucescens
CHID1 Antibody陰溝腸桿菌拉丁屬名: Enterobacter cloacae
CHP1 Antibody蘇云金芽孢桿菌用途: 害蟲生物防治
CHD4 Antibody巨獸芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus megaterium
CHP2 Antibody白布勒酵母拉丁屬名: Bullera albus
CHPF Antibody多粘類芽孢桿菌拉丁屬名: Paenibacillus polymyxa
CHPF2 Antibody新疆鹽地桿菌屬拉丁屬名: Salinibacterium xinjiangense