樣本收集及儲存:
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本:
室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本:
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
公司產(chǎn)品僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
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產(chǎn)品名稱
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eNOS-3人內(nèi)皮型一氧化氮合酶3ELISA方法
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英文名稱
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Human eNOS-3 ELISA Kit
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貨號
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PH097312
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包裝規(guī)格:液體盒裝 96T/48T
保存條件:2-8℃(長期不使用時,部分試劑應(yīng)放在-20℃條件下)。
有效期:6個月
存儲運輸:低溫避光,請勿重壓,輕拿輕放(現(xiàn)貨供應(yīng),一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠(yuǎn)地方三至五天時間到貨。)
Elisa試劑盒可測種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
Elisa試劑盒適用范圍:此試劑盒僅用于科研實驗,禁用于臨床。
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2400 ng/L
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5 號標(biāo)準(zhǔn)品
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150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
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1200ng/L
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4 號標(biāo)準(zhǔn)品
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150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
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600ng/L
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3 號標(biāo)準(zhǔn)品
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150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
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300ng/L
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2 號標(biāo)準(zhǔn)品
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150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
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150ng/L
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1 號標(biāo)準(zhǔn)品
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150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
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組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(100ul/孔),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

操作步驟:
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
樣本要求:
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
綿羊甲基化酶(Methylase)酶聯(lián)吸附測定試劑盒果生鏈核盤Mouse OC/BGP (Osteocalcin) ELISA Kit
綿羊β-促脂素(β-LPH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 大腸埃希氏Mouse OSCAR (Osteoclast Associated Receptor) ELISA Kit
綿羊骨形成蛋白6(BMP-6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 釀酒酵母Mouse ODF (Osteoclast Differentiation Factor) ELISA Kit
綿羊內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 奧氏蜜環(huán)Mouse ON (Osteonectin) ELISA Kit
綿羊過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)酶聯(lián)吸附測定試劑盒惡臭假單胞Mouse OPGL (Osteoprotegerin Ligand) ELISA Kit
綿羊SPARC樣蛋白1(SPARCL1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒鏈格孢M(jìn)ouse OVA sIgE (Ovalbumin Specific IgE) ELISA Kit
綿羊趨化素樣因子超家族成員8(CKLFSF8)酶聯(lián)吸附測定試劑盒大腸埃希Mouse CA125 (Carbohydrate Antigen 125) ELISA Kit
綿羊集聚蛋白(AGRN)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 秀珍菇Mouse pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit
綿羊組織因子途徑抑制因子(TFPI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒大腸桿Mouse OLAb (Oxidized Lowdensity Lipoprotein Antibody) ELISA Kit
綿羊抗中性粒彈性蛋白酶抗體(ANEA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒灰色鏈霉灰色亞種Mouse MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) ELISA Kit
綿羊載脂蛋白H(ApoH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 枯草芽孢桿Mouse PP (Pancreatic Polypeptide) ELISA Kit
綿羊真核翻譯起始因子3a(eIF3a)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 脫葉鏈霉Mouse PTH (Parathyroid Hormone) ELISA Kit
綿羊補體成分7(C7)酶聯(lián)吸附測定試劑盒卷枝毛霉Mouse PTHR2 (Parathyroid Hormone Receptor 2) ELISA Kit
綿羊粘蛋白5B(MUC5B)酶聯(lián)吸附測定試劑盒埃里希正青霉Mouse PTHrP (Parathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit
綿羊卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 燼灰吸水鏈霉Mouse Pax (Paxillin) ELISA Kit
eNOS-3人內(nèi)皮型一氧化氮合酶3ELISA方法成熟T增殖蛋白1抗體Human NR2C1(Nuclear receptor subfamily 2 group C member 1) ELISA Kit20(S)-原人參三醇
絲裂原活化蛋白激酶8相互作用蛋白1抗體Human NR2B ELISA KitBOC-Nim-芐基-L-組氨酸
肌球蛋白輕鏈6抗體Human NOVA2 ELISA KitD-絲氨酸
磷酸化肌增強因子2C抗體Human F2R(Proteinase-activated receptor 1) ELISA KitDL-高苯丙氨酸
磷酸化黑色素瘤粘附分子CD146抗體Human NOX3(NADPH oxidase 3) ELISA Kit新霉素硫酸鹽
肌增強因子2C抗體Human NOXA2/p67phox ELISA Kit2-硫代酸
促黑γ1抗體Human NMUR1 ELISA Kit氟化鈉
小鼠抗酮酸激酶-M2抗體Human NNT ELISA Kit原釩酸鈉