影響pcr特異性的因素如下:
許多因素可以影響pcr的特異性,在此歸納,供大家參考:
①退火步驟的嚴(yán)格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。
②減短退火時(shí)間及延伸時(shí)間可以減少錯(cuò)誤引發(fā)及錯(cuò)誤延伸。
③引物二聚體是zui常見(jiàn)的副產(chǎn)品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯(cuò)誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。
④改變mgcl2(有時(shí)kcl)濃度可以改進(jìn)特異性,這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對(duì)taq酶的直接作用。
一般認(rèn)為PCR產(chǎn)物應(yīng)在48h以內(nèi)完成電泳檢測(cè),有些zui好于當(dāng)日電泳檢測(cè),大于48h后帶型就會(huì)出現(xiàn)不規(guī)則,甚至消失。