提高qPCR反應(yīng)的靈敏度與特異性方法：

1、首先確定模板RNA完整性好，無DNA污染。

2、RNA模板中不應(yīng)含有擴(kuò)增反應(yīng)抑制劑。

3、為了防止模板降解，在反應(yīng)體系中加入RNase抑制劑RNasin。

4、使用適量的模板RNA，模板量太多會(huì)降低特異性，太少會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增不出條帶或條帶太弱。

5、若模板中有二級(jí)結(jié)構(gòu)，可通過提高逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度來提高擴(kuò)增效果。

6、設(shè)計(jì)引物時(shí)，避免在引物3’端含有互補(bǔ)序列，避免形成內(nèi)部發(fā)卡結(jié)構(gòu)。