細(xì)胞復(fù)蘇的基本原則：
從液氮或80°C冰箱中取出冷凍的細(xì)胞樣本，立即放入37°C水浴中，輕輕搖動以實(shí)現(xiàn)快速解凍。此過程應(yīng)控制在1分鐘內(nèi)完成，以減少冰晶對細(xì)胞的損傷。
2、轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基
解凍后，迅速將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有預(yù)熱至37°C的完全培養(yǎng)基的離心管中。完全培養(yǎng)基應(yīng)含有必要的營養(yǎng)成分、生長因子和抗生 素。
3、離心和重懸
將細(xì)胞懸液在10001500 rpm下離心5分鐘，以去除冷凍保護(hù)劑。小心吸去上清液，加入適量的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
細(xì)胞復(fù)蘇后的狀態(tài)評估
細(xì)胞復(fù)蘇后，不能直接開始實(shí)驗(yàn)，需要先評估細(xì)胞狀態(tài)，確保細(xì)胞恢復(fù)到正常生長狀態(tài)。
1、細(xì)胞形態(tài)
使用顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，健康的細(xì)胞應(yīng)具有典型的形態(tài)特征。比如，貼壁細(xì)胞應(yīng)該貼壁良好，細(xì)胞形態(tài)完整；懸浮細(xì)胞應(yīng)該形態(tài)規(guī)則，沒有明顯的碎片。
2、細(xì)胞活力
通過臺盼藍(lán)排斥試驗(yàn)或MTT試驗(yàn)等方法測定細(xì)胞活力。細(xì)胞活力應(yīng)高于90%，這通常通過臺盼藍(lán)排斥試驗(yàn)來評估。
3、生長速率
監(jiān)測細(xì)胞生長曲線，評估細(xì)胞增殖速度是否恢復(fù)正常。細(xì)胞生長速率穩(wěn)定，沒有下降的趨勢，才說明細(xì)胞狀態(tài)良好。