ELISA實驗前準備好所需的實驗試劑，主要包括96孔高吸附酶標板，抗原，包被液，封閉液，待測抗體，酶標二抗，抗體稀釋液，洗滌液，顯色液TMB，終止液。

1. 首先確認抗原名稱／濃度，用包被液稀釋抗原，將稀釋好的抗原加入96孔板，加在酶標板底部，不得粘在孔壁上。然后蓋上封板膜，于4℃過夜或37℃2小時。

2. 倒去未吸附的抗原稀釋液，加入2%BSA進行封閉，4℃過夜或37℃2h。

3. 按實驗設(shè)計要求對待測抗體進行稀釋，加入包被有抗原且封閉好的酶標板，37度孵育1～2小時。注意使用排槍時不可戳到酶標板底部，每次排槍吸液體時液面相平。

4. 洗板后，加入酶標二抗，37度孵育1～2小時。

5. 洗板，若孵育時間較長可增加洗板次數(shù)。

6. 加入TMB于37度進行顯色5～20分鐘，觀察顏色變化。

7. 加入草酸終止顯色，將96孔板置于酶標儀讀取波長為450nm的吸光值。

所以封閉液是2%BSA（2gBSA加100ml的水）