ELISA試驗(yàn)間接法原理:利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。
間接法常用于檢測(cè)抗體,一般的操作步驟為:
1、 將已知的抗原固著于塑膠孔盤(pán)上,完成后洗去多余的抗原。
2、加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)的一次抗體,則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
3、洗去多余待測(cè)檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測(cè)的一次抗體鍵結(jié)。
4、 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值(OD值),以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。