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如何長(zhǎng)期維持細(xì)胞株?

細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)**傳代成功后即為細(xì)胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限, 可稱為有限細(xì)胞系(finite cell line), 如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuous cell line), 培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。 所以細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
給養(yǎng) (給予新鮮的培養(yǎng)基) ,細(xì)胞生長(zhǎng)過程中會(huì)消耗培養(yǎng)基中的某些必需因子,必須更換培養(yǎng)基。
分瓶 (傳代、細(xì)胞數(shù)批減少),細(xì)胞數(shù)量不斷增長(zhǎng),超出容器和培養(yǎng)基的負(fù)荷。(PS: 培養(yǎng)和傳代是同時(shí)進(jìn)行的,很難只進(jìn)行一個(gè)而不進(jìn)行另一個(gè)操作。)
凍存 細(xì)胞株都必須分裝凍存樣品??梢宰鳛閭溆?,防止細(xì)胞表型的漂變或是污染。
時(shí)刻觀察你的細(xì)胞,不要在沒有進(jìn)行倒置顯微鏡觀察的情況下就進(jìn)行細(xì)胞傳代、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)或凍存細(xì)胞。通過連續(xù)的觀察,你可以在污染沒有成為主要危害前發(fā)現(xiàn)它,還能在細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化時(shí)知道漂變的產(chǎn)生,還可以決定什么時(shí)侯傳代、什么時(shí)候進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以及什么時(shí)候放棄實(shí)驗(yàn)。