操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒問題后再批量應(yīng)用。
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產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
T1/LUC |
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分類 |
小鼠細胞系 |
貨號 |
XG-X9471 |
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組織來源 |
見說明 |
形態(tài) |
上皮細胞樣 |
細胞別稱；4T1-LUC；小鼠乳腺癌細胞-LUC；小鼠乳腺癌細胞株-熒光素酶標記
種屬來源；小鼠
組織來源；
生長特性；貼壁生長
細胞形態(tài)；上皮細胞樣
細胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景介紹；Luciferase 4T1細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶。該細胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。4T1細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。4T1細胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當4T1細胞注射到BALB/c小鼠中時，4T1細胞會自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動物模型。4T1細胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細胞的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到，沒必要數(shù)結(jié)或稱重器官。
生物等級；1
細胞規(guī)格；1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
保藏機構(gòu)；ATCC; CRL-2539
培養(yǎng)基；90%1640+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
運輸和保存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1） 凍存細胞的復(fù)蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
小鼠天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)elisa檢測試劑盒
大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)elisa分析檢測試劑盒
細胞COT激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人胱硫醚β-合酶(CBS)elisa分析檢測試劑盒
非位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交印跡完全試劑盒
人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)elisa分析檢測試劑盒
大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)氨基端肽(NTXⅠ)elisa檢測試劑盒
小鼠磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)elisa分析檢測試劑盒
細胞分裂周期蛋白16抗體 APC6
細胞遷移誘導(dǎo)因子5抗體 RAC1
TOMM40抗體 TOMM40
WBP2蛋白抗體 WBP2
AF750標記的乳鐵蛋白抗體 Lactoferrin, Alexa Flour 750 conjugated
APC標記人CD269 (BCMA)單克隆抗體 human CD269 (BCMA)/APC
巨細胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體 HCMV pp65
可溶性附著蛋白α-SNAP抗體 Alpha SNAP
造血干細胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體 HAX1
整合素αM抗體
富含亮氨酸重復(fù)蛋白8B抗體 LRRC8B
鈣粘蛋白16抗體 Cadherin 16
小鼠乳腺癌細胞帶熒光素酶；4T1/LUCHJURP蛋白抗體 HJURP
KATNAL1蛋白抗體 KATNAL1
葡萄糖6-磷酸脫氨酶1抗體 GNPDA1
熱休克蛋白70抗體 HSP70
人EB病毒早期抗原(EBEA)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
冰凍切片氧化酶和琥珀酸脫氫酶（Combined COX-SDH）雙酶活性染色試劑盒
小鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)elisa檢測試劑盒
莫洛尼白血病病毒10樣蛋白1抗體
MOV10L1
嗜酸性粒細胞陽離子型核糖核酸酶5抗體
Ear5