細(xì)胞特性
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產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
GC-2 spg |
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分類 |
小鼠細(xì)胞系 |
貨號 |
XG-X9481 |
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組織來源 |
小鼠精母細(xì)胞; SV40大T抗原轉(zhuǎn)染 |
形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
種屬來源；小鼠
組織來源；小鼠精母細(xì)胞; SV40大T抗原轉(zhuǎn)染
生長特性；貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
背景介紹；該細(xì)胞系來源于一6周齡的雄性BALB/c小鼠 新鮮分離的精母細(xì)胞通過共轉(zhuǎn)染SV40大T抗原基因 (Psv3neo) 和溫度敏感的p53抑癌基因突變 (LTRp53cG9)，建立獲得GC-spd(ts) 細(xì)胞株。該細(xì)胞經(jīng)G418篩選，培養(yǎng)6個月并經(jīng)有限稀釋法形成單細(xì)胞克隆三次。目前，該細(xì)胞已喪失其分化潛能，處于減數(shù)分裂前期。細(xì)胞含有乳多空病毒（papovavirus）
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
培養(yǎng)基；DMEM+10%FBS+1%P/S
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
運輸和保存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達70%-80%以上，可以對細(xì)胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)elisa檢測試劑盒
人蛋白酶3(PR3)elisa分析檢測試劑盒
細(xì)胞磷酸甲羥戊酸激酶（phosphomevalonate kinase）活性
小鼠維生素B9(VB9)elisa檢測試劑盒
大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa檢測試劑盒
小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)elisa檢測試劑盒
防脫載玻片經(jīng)APES處理 50片
細(xì)胞NF KAPPA B P65蛋白表達比色法定量檢測試劑盒
馬白介素6(IL-6)elisa分析檢測試劑盒
味覺2型受體蛋白家族49抗體 TAS2R49
細(xì)胞骨架銜接蛋白BIN3抗體 BIN3
src原癌基因單克隆抗體 SRC
TRIM43B蛋白抗體 TRIM43B
AF680標(biāo)記的上皮細(xì)胞粘附分子（CD326）抗體 EpCAM, Alexa Fluor 680 conjugated
AF750標(biāo)記的造血干細(xì)胞抗原CD133抗體 CD133, Alexa Fluor 750 conjugated
緊密連接蛋白2單克隆抗體 Claudin 2
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白126抗體 CCDC126
原鈣粘蛋白γA1抗體 PCDHGA1
粘蛋白20抗體 MUC20
分泌型磷脂酶A2亞基5抗體 Secretory phospholipase A2 Type V
富含脯氨酸蛋白18抗體 PRR18
小鼠精母細(xì)胞；GC2 spgG蛋白偶聯(lián)受體γ4抗體 G gamma4
HRP標(biāo)記的人CD34單克隆抗體 CD34, HRP conjugated
凝血酶原酶/維介素抗體 FGL2
羥乙基淀粉抗體 Hydroxyethyk starch
大鼠促黃體 （LH）elisa檢測試劑盒
小鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)elisa分析檢測試劑盒
綿羊甲狀腺素(T4)elisa分析檢測試劑盒
腦瘤相關(guān)基因抗體
Netrin G2 Ligand
生長分化因子7抗體
GDF7
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒問題后再批量應(yīng)用。