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細(xì)胞特性
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
英文名稱(chēng) |
COS-1:COS1 |
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分類(lèi) |
猴細(xì)胞系 |
貨號(hào) |
XG-X3755 |
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組織來(lái)源 |
腎；SV40轉(zhuǎn)染 |
形態(tài) |
成纖維細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 COS-1細(xì)胞源自CV-1細(xì)胞，經(jīng)帶有編碼野生型T抗原的起始失活突變的SV40轉(zhuǎn)染得到。COS-1細(xì)胞含有一個(gè)來(lái)自SV40基因組全部早期區(qū)域的組成型拷貝。
年齡（性別） 成年
組織來(lái)源 腎；SV40轉(zhuǎn)染
細(xì)胞類(lèi)型 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系
生物等級(jí) 2
倍增時(shí)間 ~48 hours
基因表達(dá)情況 T antigen, This is an African green monkey kidney fibroblast-like cell line suitable for transfection by vectors requiring expression of SV40 T antigen. The cells are EBNA negative, negative for Fc receptors and negative for complement receptors.
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1650 BCRC; 60002 BCRJ; 0070 DSMZ; ACC-63 ECACC; 88031701
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
核鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性蛋白激酶磷酸酶抗體 PPM1E
核突觸蛋白抗體 Alpha-Synuclein
周期素依賴(lài)激酶抑制劑/P27單克隆抗體 CDKN1B
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPγ抗體 CEBP gamma
三羧酸載體蛋白SFXN1抗體 SFXN1
神經(jīng)肽S抗體 Neuropeptide S
MIST1單克隆抗體
NDUFB11蛋白抗體 NDUFB11
磷酸化干擾素gamma受體1蛋白抗體 phospho-IFNGR1 (Tyr457)
磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶A3+A4+A5抗體 phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779)
CENTA2蛋白抗體 Centaurin alpha 2
Dermokine β蛋白抗體 Dermokine beta
腺苷酸硫酸激酶2抗體 PAPSS2
鋅指蛋白161抗體 ZFP161
白細(xì)胞介素-20抗體 IL20
補(bǔ)體C3g片段抗體 Complement C3g fragment
丙酮酸激酶PK測(cè)試盒測(cè)組織、血清 50管/48樣 紫外比色法
COS-1非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞組織鈣離子濃度熒光定量檢測(cè)試劑盒
小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa分析檢測(cè)試劑盒
GST融合蛋白因子10α（FACTOR Xa）酶切試劑盒
細(xì)胞結(jié)構(gòu)型內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成酶（cNOS/NOS3/eNOS）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
人補(bǔ)體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
大鼠催乳素(PRL)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠載脂蛋白B(ApoB)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠封閉蛋白2(CLDN2)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠Apelin蛋白(APLN)elisa檢測(cè)試劑盒
人體p16基因甲基化檢測(cè)試劑盒
人1型1-磷酸鞘氨醇受體(S1P1)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
磷酸激酶α1抗體
PHKA1
熱休克因子結(jié)合蛋白1抗體
HSBP1
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測(cè)試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應(yīng)用。