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操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測(cè)試，沒問題后再批量應(yīng)用。
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產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
UMNSAH/DF-1:UMNSAHDF1 |
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分類 |
雞細(xì)胞系 |
貨號(hào) |
XG-X3756 |
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組織來源 |
胚胎，自發(fā)永生化 |
形態(tài) |
成纖維細(xì)胞樣 |
細(xì)胞別稱：UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1
種屬來源：雞
年齡性別：10日齡
組織來源：胚胎，自發(fā)永生化
生長特性：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
背景簡介：
生物等級(jí)：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無
基因表達(dá)情況：
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-12203
培養(yǎng)基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間：~22-36 hours
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠甘氨酸脫氫酶(GLDC)elisa檢測(cè)試劑盒
糖原磷酸化酶b（GPb）試劑盒
通用型總淀粉生物酶比色法定量檢測(cè)試劑盒
組織及血液堿性磷酸酶（AKP/ALP）測(cè)試盒
大鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞半胱-7（CASPASE-7）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
人雌二醇(E2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員10A(TNFRSF10A)elisa檢測(cè)試劑盒
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 GLUT5
驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員25抗體 KIF25
G蛋白偶聯(lián)受體66/神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體1抗體 NMUR1/GPR66
HER2受體抗體 HER2 receptor
有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體 INSC
載脂蛋白J（APOJ）抗體 Clusterin
紡錘體點(diǎn)構(gòu)成蛋白25抗體 SPC25
富含精氨酸/絲氨酸剪切因子2B抗體 SFRS2B
UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞硒酶抗體 SCLY
細(xì)胞角蛋白19抗體 Cytokeratin 19
TATA盒結(jié)合蛋白相關(guān)因子TAF1B抗體 TAF1B
T細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體 VSIG4
AF750標(biāo)記的CD19抗體 CD19, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy5.5標(biāo)記小鼠CD8a單克隆抗體 mouse CD8a/APC-Cy5.5
精子頂體前體蛋白抗體 Acrosin
跨膜絲氨酸蛋白酶13抗體 TMPRSS13
大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠整合素αM(ITGαM)elisa檢測(cè)試劑盒
人不對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)elisa檢測(cè)試劑盒
白細(xì)胞介素27β抗體
IL-27beta
果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體
alpha-L-arabinofuranosidase