操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒問題后再批量應(yīng)用。
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產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
MLE-12:MLE12 |
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分類 |
小鼠細(xì)胞系 |
貨號 |
XG-X3665 |
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組織來源 |
肺組織 |
形態(tài) |
上皮樣、多角 |
細(xì)胞別稱：MLE-12
種屬來源：小鼠
年齡性別：暫無
組織來源：肺組織
生長特性：貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)：上皮樣、多角
特征特性:組織來源：于正常小鼠肺組織。 （1） 產(chǎn)生、分泌并再利用肺表面活性物質(zhì)。 （2） 含Na+-K+-ATP酶和Na+通道，調(diào)節(jié)肺 Na+傳遞。 （3） 維持著肺液體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定平衡。
生物等級：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
培養(yǎng)基：DMEM-H/F12培養(yǎng)基：90%DMEM-H/F12+10%FBSS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮
倍增時(shí)間：暫無
傳代比例：1:02
換液頻率：2~3次/周
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
突觸相關(guān)蛋白25結(jié)合蛋白抗體 Anti-SNAPIN/SNAP25BP
FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgM
Rabbit Anti-Mouse IgM / FITC
EFHC1蛋白抗體
原鈣粘附蛋白β6抗體
PCDHB6
半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體
Caspase-13 + 4
T細(xì)胞介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Tbx21抗體 Anti-Tbx21/T-bet
腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 Anti-PACAP-38
抑癌基因p16/p14/P19抗體 Anti-P14ARF/CDKN2A
EFHC1
NFκB激活蛋白205抗體 Anti-ZDHHC17/HIP14
天冬氨酸蛋白酶ASP4抗體 Anti-NAPSIN A/ASP4
受體活性修飾蛋白1抗體 Anti-RAMP1
轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族39成員7抗體 Anti-SLC39A7
大鼠B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子α(NFKBIA)elisa生化檢測試劑盒
MLE-12小鼠肺上皮細(xì)胞NFKBIA ELISA kit
人肝細(xì)胞核因子1β(HNF-1B)elisa生化檢測試劑盒
HumanHNF-1BELISAKit
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)elisa檢測試劑盒
小鼠棕櫚?；さ鞍?span>6(MPP6)elisa檢測試劑盒
人促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)elisa檢測試劑盒
沙門氏菌（Salmonella）鑒定
MARCKS樣蛋白1抗體
MARCKSL1
19號染色體開放閱讀框24抗體
C19orf24
感覺神經(jīng)性耳聾常染色體隱性遺傳61抗體 Anti-Slc26a5
RGAG4蛋白抗體 Anti-RGAG4
神經(jīng)細(xì)胞穿透素2抗體 Anti-NPTX2
信號通路WNT10A抗體 Anti-WNT10A