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操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測(cè)試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應(yīng)用。
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產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
293T |
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分類(lèi) |
人細(xì)胞系 |
貨號(hào) |
XG-X3215 |
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組織來(lái)源 |
腎 |
形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
細(xì)胞別稱；293T人胚腎細(xì)胞（STR鑒定正確）
種屬來(lái)源；人
組織來(lái)源；腎
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景簡(jiǎn)介；293細(xì)胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T
STR位點(diǎn)；Amelogenin:X；CSF1PO:11,12；D13S317:12,14；D16S539:9,13；D18S51:17,18；D21S11:28,30.2；D3S1358:15,16,17；D5S818:8,9；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:23；PentaD:9,10；PentaE:7,15；TH01:7,9.3；TPOX:11；VWA:16,19
生物等級(jí)；1
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-3216 DSMZ; ACC-635；中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)
倍時(shí)間；~24-30 hours
培養(yǎng)基；90% DMEM+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
磷酸化CD156b抗體 phospho-ADAM17 (Thr735)
磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體 phospho-CTNNBIP1 (Thr43+Ser50)
Bcl2 alpha蛋白抗體 Bcl-2 alpha
CD13抗體 CD13
細(xì)胞中心粒蛋白抗體 POC5
線粒體核糖體蛋白L2抗體 MRPL2
β淀粉樣肽（C端）抗體 Aβ1-42 (CT)
艾滋病病毒1誘導(dǎo)蛋白HIN1抗體 OTUD4/HIV 1 induced protein HIN 1
溶質(zhì)載體家族蛋白22成員A7抗體 SLC22A7
三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體 ABCD4
LIM結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白3抗體 LDB3
Menin抑癌蛋白抗體 Menin
腫瘤/睪丸抗原47B1抗體 CT47B1
周期素B3抗體 Cyclin B3
干燥綜合征相關(guān)蛋白2抗體 RO60
海馬豐富基因轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體 HIAT1
Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T
293T人胚腎細(xì)胞小鼠白介素1β前體(pro-IL1B)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)elisa檢測(cè)試劑盒
石蠟切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
小鼠神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1(NCAM1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠肌紅蛋白(MYO)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞PLK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
人基質(zhì)金屬蛋白酶-10（MMP-10）elisa檢測(cè)試劑盒
牛唾液酸(SA)elisa分析檢測(cè)試劑盒
石蠟切片總游離菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑盒
小鼠黃體**素(LH)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)elisa分析檢測(cè)試劑盒
鵝鈣結(jié)合蛋白(CR)elisa分析檢測(cè)試劑盒
CR ELISA Kit
人單純皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanherpessimplexvirusⅠ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)antibody(IgG)ELISAkit