PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

小鼠T細胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL大內(nèi)皮素-1（1-38），人Big Endothelin-1 (1-38), human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

MLF, 小鼠成纖維細胞 Mouse大內(nèi)皮素-1 （1-39），豬Big Endothelin -1 (1-39),porcine質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細胞裂解液 (陽性對照) 腦鈉素-32，大鼠BNP-32, rat質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人結(jié)直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T]鈴蟾肽Bombesin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 緩激肽Bradykinin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
新生牛眼晶體上皮細胞;NBLE苯駢三氮唑（BTA,1,2,3-苯駢三氮唑)1H-Benzotriazole質(zhì)量規(guī)格：AR,分析

NCI-H2087細胞，人非小細胞肺腺癌細胞 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝的NIH3T3細胞,PA317細胞 CM-R095大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細胞完全培養(yǎng)基100mL鹽酸倍他司汀Betahistine Di質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

RL95-2(人內(nèi)膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸倍他司汀（標(biāo)準(zhǔn)品）Betahistine Di質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

Gibco 10725018 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid with L-Glutamine, without Calcium Chloride 500 ml甲磺酸倍他司汀Betahistine Dimesilate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人骨骼肌衛(wèi)星細胞RNAHSkMSC miRNA5 μg胰島素(豬)INSULIN質(zhì)量規(guī)格：BR,來源豬胰臟
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人細胞裂解液 (陽性對照) 磺，英文名或英文縮寫：Sulfamer，級別：BR，95-100%，規(guī)格：100毫升

腎實質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3，3-二安基聯(lián)本安言醋鹽 3,3',4,4'-Biphqnyltqtrcminq tqtrcxy7nochloridq

3T6swiss細胞，小鼠胚胎成纖維細胞 人癌細胞,M453細胞 谷胱甘肽過氧化物酶分析試劑盒GPXβ-蛋白組學(xué)級透明無色液體RT不sigma

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-1脫葉靈，英文名或英文縮寫：TDZ，級別：高，99%，規(guī)格：50毫克

IL13RA2 Others Human 人 IL13RA2 / IL13R 人細胞裂解液 (陽性對照) 7778-80-5鉀potewwium sulfate;Tartarus vitriolatus;Salt of leMery
豬熱休克蛋白20(HSP-20)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sorafenib tosylate  中文名：索拉非尼  分子式：C28H24ClF3N4O6S 

豬去甲上腺素elisa試劑盒   豬去甲上腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬去甲上腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬去甲上腺素試劑盒、豬去甲上腺素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Sorafenib  284461-73-0  中文名：索拉非尼  分子式：C21H16ClF3N4O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

豬去甲上腺素(NE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Soyacerebroside I  中文名：  分子式：C40H75NO9  度：95.0%

豬去甲上腺素(NE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Soyacerebroside II  中文名：大豆腦苷II  分子式：C40H75NO9  度：98.0%

豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）試劑盒恒溫?zé)晒夥?/span>豬前列環(huán)素（PGI2）Elisa試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Soyacerebroside I  114297-20-0  中文名：  分子式：C40H75NO9  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  抗?jié)?span>; 番杏; 大豆; 大蒜; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫