PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

97-53-0丁香酚規(guī)格  Eugenol   組織堿性1酸酶活性比色法定量檢測試劑盒20

97230-47-2品中文苦玄參苷IA說明書  Picfeltarraenin IA   組織甲基化組蛋白H3-K9染色質(zhì)沉淀分析(CHIP)試劑盒10

970-74-1表沒食子兒茶素廠家  EGC   組織脊髓過氧化酶(MPO)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒20

96990-18-0地膚子皂苷Ic品牌  Momordin Ic   組織脊髓過氧化酶(MPO)活性比色法定量檢測試劑盒20

96574-01-5丹酚酸A品牌  Salvianolic acid A   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)捕獲檢測試劑盒20
小鼠組織蛋白酶Z(CTSZ)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSZ ELISA Kit  57420-46-98-O-乙酰山梔苷甲酯說明書  8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester

綿羊補體片段3b受體(C3bR)ELISA檢測試劑盒SheepComplemefragme3brccptor,C3bRELISAKit 96T/48T  8-乙氧基滇烏堿品牌  8-O-ethylyunaconitine

犬胰島素原(PI)試劑盒 Canine Proinsulin,PI ELISA Kit  23513-14-66-姜酚規(guī)格  6-Gingerol

英文名稱Mouseapelin-12ELISAKit小鼠apelin-12(apelin-12)規(guī)格：96T/48T  555-66-86-姜烯酚廠家  6-Shogaol

病毒HRP標(biāo)記制備試劑盒5(100微克/)  23513-15-710-姜酚說明書  10-Gingerol
RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISAKit大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  7770-78-7牛蒡子苷元廠家  Arctigenin

載玻片細(xì)胞RHO蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  260413-62-5女貞苷說明書  ligustroflavone

Monkeyβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISA試劑盒猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1063-77-0諾米林品牌  Nomilin

小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 ，英文名： NGAL ELISA Kit  88182-33-6歐當(dāng)歸內(nèi)酯A規(guī)格  Levistilide A

犬細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA檢測試劑盒Canineiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1/CD54ELISAKit 96T/48T  482-44-0歐前胡素廠家  Imperatorin
豬生長**   英文名稱：   Porcine Growth Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GH  S-Benzyl-L-cysteine  中文名：S-芐基-L-半胱氨酸  分子式：C10H13NO2S  

豬上腺素elisa試劑盒   豬上腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬上腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬上腺素試劑盒、豬上腺素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Rubanthrone A  中文名：  分子式：C17H14O10 

豬上腺素(EPI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝            cholate 361-09-1  中文名：膽酸鈉  分子式：C24H39NaO5 

豬上腺素(EPI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Telmisartan  144701-48-4  中文名：替米沙坦  分子式：C33H30N4O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

豬上腺素   英文名稱：   Porcine    規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EPI  Stauntosaponin A  中文名：  分子式：C28H38O7
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR試劑盒三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。