PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強(qiáng)

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

1358-76-5鉤吻素子說明書  Koumine   英文名稱RatG-CSFELISAKit大鼠粒細(xì)胞-克隆刺激因子(G-CSF)規(guī)格：96T/48T

1358-76-5鉤吻素子廠家  Koumine   英文名稱RatG-CSFELISAKit大鼠粒細(xì)胞-克隆刺激因子(G-CSF)規(guī)格：96T/48T

1354-84-3雪上一枝蒿甲素說明書  Bullatine A  英文名稱RatGCP-2ELISAKit大鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白-2(GCP-2)規(guī)格：96T/48T

135247-95-9白頭翁皂苷B說明書  Pulchinenoside B   英文名稱RatGCP-2ELISAKit大鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白-2(GCP-2)規(guī)格：96T/48T

1352001-09-23β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇廠家  3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol   英文名稱RatGamma-aminobyricacidELISAKit大鼠γ氨基(GABA)規(guī)格：96T/48T
小鼠孕/孕酮(PROG)ELISA試劑盒 ，英文名： PROG ELISA Kit  70831-56-0二咖啡酰菊苣酸規(guī)格  Cichoric acid

小鼠多巴胺(DA)ELISA檢測試劑盒Mousedopamine,DAELISAKit 96T/48T  86632-03-33,4,5-三咖啡?？鼘幩釓S家  3,4,5-Tricaffeoylquinic acid

人解整合素樣金屬蛋白酶33(ADAM33)試劑盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 33,ADAM33 ELISA Kit  31721-94-55,7-二羥基色原酮說明書  5,7-dihydroxychromone

Ratai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISAKit大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  107390-08-9伽升沃D品牌  Garcinone D

組蛋白H2A-T1291酸化檢測試劑盒10/20等  76996-27-5伽升沃C規(guī)格  Garcinone C
英文名稱HumanNOELISAKit人(NO)ELISA規(guī)格：96T/48T  93-39-0茵芋苷品牌  Skimmin

化微粒體1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測試劑盒20  56725-99-6羊藿苷I規(guī)格  Icarisid I

RatImmunoglobulinG,IgGELISA試劑盒大鼠球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  113558-15-9羊藿苷II廠家  Icarisid II

小鼠粘蛋白5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC5AC ELISA Kit  489-32-7羊藿苷說明書  Icariin

白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin-8,IL-8ELISAKit 96T/48T  5240-95-9羊藿素品牌  Icaritin
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Ropivacaine mesylate  854056-07-8  中文名：甲磺酸羅哌卡因  分子式：C18H30N2O4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒   48T                 Ropivacaine mesylate  854056-07-8  中文名：甲磺酸羅哌卡因  分子式：C18H30N2O4S 

轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因核酸檢測試劑盒   48T  Ropivacaine   中文名：鹽酸羅哌卡因  分子式：C17H27ClN2O  度：98.0%

轉(zhuǎn)基因植物NOS基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Ropivacaine mesylate  中文名：甲磺酸羅哌卡因  分子式：C18H30N2O4S  度：98.0%

轉(zhuǎn)基因植物NOS基因核酸檢測試劑盒   48T  Ropivacaine mesylate  中文名：甲磺酸羅哌卡因  分子式：C18H30N2O4S
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
布氏桿菌(BS)定性試劑盒PCR法三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。