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產(chǎn)品分類
產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:乙型腦炎病毒(JEV)定性試劑盒RT-PCR 法

  • 產(chǎn)品型號:XG-R64219
  • 產(chǎn)品廠商:西格
  • 產(chǎn)品價格:0
  • 折扣價格:0
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簡單介紹:
乙型腦炎病毒(JEV)定性試劑盒RT-PCR 法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
詳情介紹:

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強

產(chǎn)品名稱

乙型腦炎病毒(JEV)定性試劑盒RT-PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R64219

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人海馬神經(jīng)元 Human樟腦(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定(-)-CAMPHOR

SLAMF6 Others Mouse 小鼠 SLAMF6 / Ly108 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 11-羰基-β-乙酰乳香酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定3-ACETYL-11-KETO-BETA-BOSWELLIC ACID

小鼠肺腺癌細(xì)胞系;LA7953',4',5',5,7-五甲氧基黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定3',4',5',5,7-PENTAMETHOXYFLAVONE

CRELD1 Others Human CRELD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 金橙II(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:檢查OrangeΙΙ

SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SH-SY5Y human neuroblastoma cells MEM/F-12(1:1)+10%FBS法莫替丁相關(guān)化合物B質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Famotidine Related Compound B
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B4N-乙酰-L-酪氨酸N-Acetyl-L-Tyrosine質(zhì)量規(guī)格:0.98

Bel-7402細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人胚纖維細(xì)胞系,HEF細(xì)胞 大鼠纖維母細(xì)胞;1/EJ 1-1N-乙酰-L-色氨酸乙酯Ac-Trp-Oet質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,BR

KU812(人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N-乙酰-DL-色氨酸N-Acetyl-DL-tryptophan質(zhì)量規(guī)格:0.98

Promocell C-28011 Mesenchymal Stem CellAdipogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基(即用型) 100mlN-甲酰-DL-色氨酸Nalpha-Formyl-DL-tryptophan質(zhì)量規(guī)格:0.98

人表皮角質(zhì)細(xì)胞-RNAHEK-a NAL-酪氨酸叔丁酯L-Tyrosine tert-butyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人表皮色素細(xì)胞-中色素cDNAHEM-m cDNA4-基安替比林250毫克保存:-20

FGF21 Others Mouse 小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酰炳同 ChroMiuM(III) ccqtylccqtonctq 1679-31-

AAV-293 人胚腎細(xì)胞聚乙二醇 10000 Poly(ethylene glycol) 10,000 (PEG 10000) 25322-68-3 500G 通用試劑

CL-0214SK-N-SH(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2LIM培養(yǎng)基1RT

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(D-葡萄糖-6-1酸二鈉)
轉(zhuǎn)錄因子AP-1   英文名稱:   anscription Factors AP-1   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   AP-1  n-Octylbenzene  中文名:  分子式:C14H22 

轉(zhuǎn)錄因子 AP-1(AP-1)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝  Amprolium   137-88-2  中文名:鹽酸氨丙林  分子式:C14H20Cl2N4 

轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白   英文名稱:   Human ansthyretin   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   T  Ritonavir  155213-67-5  中文名:利托那韋  分子式:C37H48N6O5S2  度:98.0%   

轉(zhuǎn)基因植物TE基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T                 Ropivacaine   98717-15-8  中文名:鹽酸羅哌卡因  分子式:C17H27ClN2O 

轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Rosiglitazone maleate  中文名:馬來酸羅格列酮  分子式:C22H23N3O7S
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
乙型腦炎病毒(JEV)定性試劑盒RT-PCR PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。


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