PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人心臟成纖維細(xì)胞-心室HCF-av奈拉濱質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,細(xì)胞培養(yǎng)級Nelarabine

gpc-1細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞 兔眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞,RYTF細(xì)胞 大鼠背脊髓神經(jīng)元RN-dsc醋酸奈西立肽質(zhì)量規(guī)格：>95%Nesiritide Acetate

K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2硫酸鎂七水(分子生物學(xué)級)質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物Magnesium sulfate, heptahydrate

A-431(人表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H131人角膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 人羊膜細(xì)胞;HA糖化酶;葡萄糖淀粉酶質(zhì)量規(guī)格：BR,10萬u/GGlucozyme

CM-R007大鼠支氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL聚乙二醇4000質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRPEG 4000
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480] 大鼠腎管狀上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL6-1酸葡萄糖三鈉鹽D-Gluconate 6-phosphate 3 salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PC-12(未分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)奧氮平內(nèi)酰胺雜質(zhì)Olanzapine Lactam Impurity質(zhì)量規(guī)格：美國進口

NEGR1 Others Human 人 NEGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 奧氮平硫代內(nèi)酰胺雜質(zhì)Olanzapine Thiolactam Impurity質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人肝癌細(xì)胞;Hep G2 [HepG2]2-羥甲基奧氮平2-Hydroxymethyl Olanzapine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

LILRA5 Others Rat 大鼠 LILRA5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-去甲基奧氮平N-Demethyl Olanzapine質(zhì)量規(guī)格：美國進口
S180細(xì)胞，小鼠艾氏腹水瘤細(xì)胞TCM15 MCF-7(人癌細(xì)胞) 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A苯并-12-冠4-(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)Benzo-12-crown 4-Ether

EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)苯并-18-冠6-(>96.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)Benzo-18-crown 6-Ether

HELF(人胚肺成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)12-冠-4-(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)12-Crown 4-Ether

胎兒表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)15-冠-5-(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)15-Crown 5-Ether

PDE4B Others Human 人 PDE4B / DPDE4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 倍他米 21-醋酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Betamethasone 21-acetate
490-67-5冬綠苷規(guī)格  Gaultherin   植物維生素K1(VK1)ELISA檢測試劑盒PlaVitaminK1,VK1ELISAKit 96T/48T

490-46-0表兒茶素說明書  Epicatechin   植物維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒20

490-46-0表兒茶素規(guī)格  Epicatechin   植物維生素E(VE)ELISA檢測試劑盒PlaVitaminE,VEEELISAKit 96T/48T

489-32-7羊藿苷說明書  Icariin  植物維生素D3(VD3)ELISA檢測試劑盒PlaVitaminD3,VD3ELISAkit 96T/48T

487-58-1刺桐堿廠家  hypaphorine;tryptophan betaine    植物維生素D2(VD2)ELISA檢測試劑盒PlaVitaminD2,VD2ELISAKit 96T/48T
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
牛源性成分(Bovine)試劑盒熒光-PCR法６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。