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產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
漢坦病毒2型(HTV-2)試劑盒熒光-PCR法 |
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規(guī)格 |
50T |
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貨號(hào) |
XG-R64077 |
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
105471-98-5木通苯乙醇苷B說(shuō)明書(shū) calceolarioside B 英文名稱(chēng)RatCINC-1ELISAKit大鼠CINC-1規(guī)格:96T/48T
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104-55-2肉桂醛廠家 Cinnamic aldehyde 英文名稱(chēng)RatcholesterolesteransferproteinELISAKit大鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)規(guī)格:96T/48T
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人結(jié)核菌桿(TB)抗體(IgA)試劑盒 Human
tuberculosis(TB)aibody(IgA)ELISA kit
6035-49-0白蠟樹(shù)素說(shuō)明書(shū)
Dimethylfraxetin
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組蛋白H3-K18乙?;瘷z測(cè)試劑盒10/20等 961-29-5異甘草素規(guī)格 Isoliquiritigenin
MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISA試劑盒小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 2182-14-1文多靈廠家 Vindoline
小鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒 ,英文名: INHBP ELISA Kit 473-98-3白樺脂醇說(shuō)明書(shū) Betulin
載玻片細(xì)胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 470-17-7異土木香內(nèi)酯說(shuō)明書(shū) isoalantolactone
Mouseacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISA試劑盒小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 52012-29-0異夏佛塔苷品牌 Isoschaftoside
小鼠粘蛋白5B(MUC5B)ELISA試劑盒 ,英文名: MUC5B ELISA Kit 548-19-6異銀杏素規(guī)格 Isoginkgetin
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犬球蛋白M(IgM)試劑盒 Canine Immunoglobulin M,IgM
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53956-04-0甘草酸單銨鹽廠家 Glycyrrhizic acid ammonium salt 豬透明質(zhì)酸(HA)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineHyaluronicacid,HAELISAKit
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539-15-1大麥芽堿說(shuō)明書(shū) Hordenine 豬糖化血紅蛋白A1c(A1c)試劑盒 Pig Glycated hemoglobin A1c,A1c ELISA Kit
537-73-5異阿魏酸說(shuō)明書(shū) 3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid 豬胎球蛋白A 試劑盒 Pig Fetuin A ELISA Kit
535-83-1葫蘆巴堿廠家 Trigonelline 豬胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PGF)試劑盒 Pig Placea
growth factor,PGF ELISA kit
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。



