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產(chǎn)品分類
產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:尼帕病毒(NIPAH)試劑盒熒光-PCR法

  • 產(chǎn)品型號:XG-R64068
  • 產(chǎn)品**:西格
  • 產(chǎn)品價格:0
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簡單介紹:
尼帕病毒(NIPAH)試劑盒熒光-PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
詳情介紹:

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)

產(chǎn)品名稱

尼帕病毒(NIPAH)試劑盒熒光-PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R64068

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;C3H 10T1/2 2A6普侖司特半水合物質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Pranlukast hemihydrate

LRPAP1 Others Human LRPAP1 / A2MRAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (R)-美托洛爾質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口(R)-Metoprolol

615小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株;DCSα-羥基美托洛爾(非對映)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口α-Hydroxy Metoprolol(Mixture of Diastereomers)

CD40 Others Canine CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (S)-美托洛爾質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口(S)-Metoprolol

原代單核細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml鹽酸貝那替嗪(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定BENACTYZINE
人急性母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4布地奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)Budesonide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

FGFR1 Others Human FGFR1 / CD331 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 亞葉酸鈣Calcium Folinate質(zhì)量規(guī)格:>98%,水合物,BR

CM-H110人皮膚肥大細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL亞葉酸鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)Calcium Folinate質(zhì)量規(guī)格:>98%,含量測定

5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 瘤,EL4IL-2細(xì)胞 PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)喜樹堿Camptothecin質(zhì)量規(guī)格:> 99%,喜樹提取

小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11喜樹堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Camptothecin質(zhì)量規(guī)格:HPLC99%,標(biāo)準(zhǔn)品
人胚腎細(xì)胞;2V6.11AntibodySignalEnhancer抗體信號增強(qiáng)劑蛋白組學(xué)級透明液體,搖晃時有氣泡RTsigma

IL1RN Others Rat 大鼠 IL-1RA / IL1RN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DL-β本炳安醋 3-cmino-3-phqnylpropionic ccid 614-19-7

人膀胱上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLL-ASCORBICACID抗壞血酸(維生素C)美國藥典級白色結(jié)晶粉末RTsigma

H22細(xì)胞,小鼠肝癌細(xì)胞 Neuro-2A(腦神經(jīng)瘤細(xì)胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY09091-辛烷磺酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium 1-octanesulfonate,級別:BR,99%,規(guī)格:100

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)102-25-01.3.5-三乙基本1,3,5-TRIetxylBENZENE
80321-69-3
七葉膽苷XVII規(guī)格  Gypenoside XVII  組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

80286-58-4青蒿酸規(guī)格  Artemisic acid  組織AURORA-C激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

80154-34-3豆腐果苷廠家  Helicid   組織AURORA-B激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

7-乙氧基莫諾苷規(guī)格  7-O-ethyl-morroniside   組織AURORA-A激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

79916-77-1連翹脂苷A說明書  Forsythoside A  組織ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒50
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
尼帕病毒(NIPAH)試劑盒熒光-PCR預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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