產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
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				 產品名稱  | 
			
				 人星狀病毒(HastV)試劑盒熒光-PCR法  | 
		
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				 規(guī)格  | 
			
				 50T  | 
		
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				 貨號  | 
			
				 XG-R64060  | 
		
	儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
	
	PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                 
 
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)               
 
2 μl     引物2(10pM)               
 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)     
         
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)     
         2μl
引物2(10PM)     
        2μl
Taq酶(2U/μl)     
      1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至     
         50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠成骨細胞完全培養(yǎng)基 100mLDL-α-羥基戊二酸二鈉質量規(guī)格:98%,GC,進分sigma 94577DL-α-Hydroxyglutaric
acid di salt 
P388D1小鼠樣瘤細胞 P388D1 mouse lymphoid tumor cells RPMI-1640(GIBCO)+90%馬血清+10%FBS地美溴胺質量規(guī)格:>99%,BRDemecarium Bromide
IL12B Protein Human 重組人 IL12B / P40 蛋白 (Fc 標簽)喹哪啶紅質量規(guī)格:ARQuinaldine Red
人腦微血管內皮細胞 (HBMEC) ( 5×105 ) 大鼠主動脈平滑肌細胞 細胞名稱酚酞(98%)質量規(guī)格:>98%Phenolphthalein
	CM-R057大鼠腎系膜細胞完全培養(yǎng)基100mL四溴酚藍質量規(guī)格:INDTetrabromophenol
blue
人骨肉瘤細胞;HOS苯扎氯銨(標準品)Alkyldimethylbenzylammonium
chloride質量規(guī)格:供HPLC法檢查用和容量法含量測定用
人成纖維細胞(HMF)(5×105)苯扎氯銨(標準品)Alkyldimethylbenzylammonium chloride質量規(guī)格:含量測定用
CM-H112人脂肪細胞完全培養(yǎng)基100mL甲硫酸新斯的明(標準品)Neostigmine methyl sulfate質量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
小鼠漿細胞瘤;MPC-11 小鼠直腸平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL甘草酸二鉀(標準品)Dipotassium glycyrrhizinate質量規(guī)格:含量測定
	rEPC,大鼠內皮祖細胞-骨髓 Rattus尼美舒利(標準品)Nimesulide質量規(guī)格:含量測定
293T細胞,人胚腎T細胞 人卵巢癌細胞,HO-8910細胞 人心肌細胞裂解物HCML戈米辛D(標準品)質量規(guī)格:>98.0% (LC&T),標準品Gomisin D
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-11-甲基質量規(guī)格:>98%1-Methyl Xanthine
IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人細胞裂解液 (陽性對照) 6-羧基-X-羅丹明質量規(guī)格:>95%6-Carboxy-X- rhodamine; 6-ROX
豚鼠皮膚細胞;GP-S2西侖吉肽質量規(guī)格:>97%,integrin抑制劑Cilengitide,EMD121974,NSC 707544
	IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細胞裂解液 (陽性對照) 柴胡皂苷B2(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Saikosaponin B2
94-62-2胡椒堿規(guī)格  Piperine   組織基質金屬蛋白酶(MMP-12)活性熒光定量檢測試劑盒20
94596-28-8洋川芎內酯I廠家 Senkyunolide I 組織基質金屬蛋白酶(MMP-12)活性比色法定量檢測試劑盒20
94596-27-7洋川芎內酯H規(guī)格 Senkyunolide H 組織基質金屬蛋白酶(MMP-10)活性熒光定量檢測試劑盒20
945619-74-9麥冬皂苷D說明書 Ophiopogonin D 組織基質金屬蛋白酶(MMP-10)活性比色法定量檢測試劑盒20
	94356-26-0曲札茋苷規(guī)格  3,5,3’,4’-trihydroxy-stilbene -3’-b-D-glucoside   組織基質金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒20
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
人星狀病毒(HastV)試劑盒熒光-PCR法在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
                    


