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產(chǎn)品分類
產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:碳青霉烯耐藥基因KPC試劑盒熒光-PCR法

  • 產(chǎn)品型號:XG-R64039
  • 產(chǎn)品**:西格
  • 產(chǎn)品價(jià)格:0
  • 折扣價(jià)格:0
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簡單介紹:
碳青霉烯耐藥基因KPC試劑盒熒光-PCR法保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
詳情介紹:

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)

產(chǎn)品名稱

碳青霉烯耐藥基因KPC試劑盒熒光-PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R64039

儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人顱骨造骨細(xì)胞RNAHCO miRNA5 μg亞精胺質(zhì)量規(guī)格:>99%,進(jìn)分Spermidine

HL-60細(xì)胞,白血病原髓細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H23細(xì)胞 MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞亞精胺1酸鹽質(zhì)量規(guī)格:>98%(T),進(jìn)口原裝Spermidine phosphate salt hexahydrate

豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1白楊素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品Chrysin

CD226 Others Mouse 小鼠 DNAM-1 / CD226 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 白楊素質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRChrysin

CL-0459U14(小鼠子細(xì)胞)5×106cells/瓶×2刺芒柄花素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品Formononetin
人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞;OCM-1ABYL719BYL-719質(zhì)量規(guī)格:>98%,選擇性的PI3Kα抑制劑

CSF2 Others Human GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) VRT752271VRT-752271.HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%,鹽酸鹽形式,蛋白激酶抑制劑

CoC2(懸浮) 卵巢癌奧拉甲磺酸鹽Obatoclax Mesylate;GX15-070質(zhì)量規(guī)格:≥98%,Bcl-2拮抗劑

COLO 205人結(jié)腸癌細(xì)胞 COLO 205 human colon cancer cells 1640+10% FBS羊藿素(標(biāo)準(zhǔn)品)Icaritin質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白銀杏內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginkgolide A質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品
A-204
細(xì)胞,人橫紋肌肉瘤細(xì)胞 兩歧雙歧桿菌 人肝永生化細(xì)胞;THLE-3N-去甲基羅格列酮質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口N-Desmethyl Rosiglitazone

U-118 MG(人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤) 5×106cells/瓶×25-羥基羅格列酮β-D-葡萄糖苷酸質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口5-Hydroxy Rosiglitazone β-D-Glucuronide

HT-1080(人纖維肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 LX-2, 人肝星形細(xì)胞株 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM9401磺胺嘧啶質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Sulfadiazine

人永生化細(xì)胞;CNLMG-B5537LCN-乙?;前粪奏べ|(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口N-Acetyl Sulfadiazine

RK2 Others Mouse 小鼠 RK2 / kB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 5'-羥基苯卡維地洛質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口5'-Hydroxyphenyl Carvedilol
1241-87-81-
咖啡??鼘幩釓S家  Cyclohexanecarboxylicacid   英文名稱RatE-SelectinELISAkit大鼠E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

123748-68-5七葉皂苷A規(guī)格  Escin IA   英文名稱RatEsadiol(E2)ELISAkit大鼠雌二醇(E2)ELISAKit規(guī)格:96T/48T

123350-57-25補(bǔ)充中2說明書  Hederagenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (12)-α-L-arabinopyranoside   英文名稱RatEsadiol(E2)ELISAkit大鼠雌二醇(E2)ELISAKit規(guī)格:96T/48T

122-48-5姜酮規(guī)格  Zingerone   英文名稱RatERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)規(guī)格:96T/48T

122413-01-8雞屎藤苷酸甲酯廠家  paederosidic acid methyl ester   英文名稱RatERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)規(guī)格:96T/48T
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
碳青霉烯耐藥基因KPC試劑盒熒光-PCR(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60
℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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