PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-c NAdAMP;2’-脫氧腺苷-5‘-單1酸質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR2'-Deoxyadenosine 5'-monophosphate

J82細(xì)胞，膀胱癌細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞,WI-38細(xì)胞 原代系膜細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：BR,羅氏進(jìn)分FAD-Na2

豹貓肌肉成纖維樣細(xì)胞;LCM4GTP;鳥苷-5‘-三1酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：>90%,分子生物學(xué)級(jí)GTP, 3 Salt

WISP1 Others Human 人 WISP1 / CCN4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) D-正纈氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-Norvaline

CL-0313293FT(人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRH-D-Phe-OMe·HCl
人鼻咽癌細(xì)胞;CNE-2Z 大鼠腎上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL十一1酸鋅Zinc undecylenate質(zhì)量規(guī)格：>98%

NG108-15 大鼠小鼠雜合神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞氨甲酰甲膽堿；氯貝膽堿Carbamyl-β-methylcholine chloride 質(zhì)量規(guī)格：>99%,美國(guó)進(jìn)口

IL2RA Others Mouse 小鼠 IL2RA / CD25 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 茄尼醇（標(biāo)準(zhǔn)品）Solanesol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品

人肺腺癌細(xì)胞;Calu-3斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

PRLR Others Rat 大鼠 PRLR / Prolactin receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 秦皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Fraxin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
L6565細(xì)胞，小鼠白血病克隆細(xì)胞系 破傷風(fēng)桿菌/梭菌Closidium tetani 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A4-硝基芘(>97.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)4-Nitropyrene

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 標(biāo)簽)2-氨基芴(>97.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)2-Aminofluorene

PIEC(豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2-氨基-9-芴酮(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)2-Amino-9-fluorenone

人細(xì)胞;Hela P10s-11F2-氨基-9,9-二甲基芴(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)2-Amino-9,9-dimethylfluorene

CD81 Others Human 人 CD81 / TAPA-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 1-代戊炔(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)1-Pentynyl Iodide
R型三七皂苷R2廠家  （R）Notoginsenoside R2   組織離子(Na)濃度熒光定量檢測(cè)試劑盒20

989-51-5表沒食子兒茶素沒食子酸酯規(guī)格  EGCG   組織離子(Na)濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

98665-22-6靈芝酸G品牌  Ganoderic acid G    組織科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定性檢測(cè)試劑盒20

98474-78-3擬人參皂苷RT5說明書  Pseudoginsenoside RT5  組織巨噬細(xì)胞型抗酸酸性1酸酶(SACP)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

98296-48-1靈芝酸C2規(guī)格  Ganoderic acid C2    組織精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
氣腫疽梭菌（CC）試劑盒熒光-PCR法三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。