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產(chǎn)品分類
產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:莢膜組織胞漿菌試劑盒熒光PCR法

  • 產(chǎn)品型號(hào):XG-R63334
  • 產(chǎn)品**:西格
  • 產(chǎn)品價(jià)格:0
  • 折扣價(jià)格:0
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簡(jiǎn)單介紹:
莢膜組織胞漿菌試劑盒熒光PCR法保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
詳情介紹:

儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品名稱

莢膜組織胞漿菌試劑盒熒光PCR

規(guī)格

50T

貨號(hào)

XG-R63334

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。

檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

雜交瘤(B);Z1510C6D10F4G6人參皂苷Rb2(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ginsenoside Rb2

PLAC9 Others Human PLAC9 / Placea-specific 9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ginsenoside Rb3

CM-M061小鼠腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL人參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ginsenoside Rc

EC871214細(xì)胞,人食管癌細(xì)胞 人腦瘤細(xì)胞,SF763細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;TPO-CHO-I人參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ginsenoside Rd

Caco-2(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2人參二醇(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品Panaxadiol
CXCL16 Protein Rat
重組大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽)代森鋅Zineb質(zhì)量規(guī)格:>90%

PC-3(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FGFR3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 雷公藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Wilforine質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480]新藤黃酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Neogambogic acid質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

19. 干細(xì)胞系統(tǒng)延齡草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Diosgenin glucoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CM-R040大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLN-反式-對(duì)香豆酰酪胺(標(biāo)準(zhǔn)品)N-p-CouMaroyltyraMine;Paprazine質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠色素瘤細(xì)胞;B16鄰紅,英文名或英文縮寫:Cresol Red,級(jí)別:高,規(guī)格:25

HEp-2細(xì)胞,喉表皮樣癌細(xì)胞 人食管鱗癌,KYSE70細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1(二基安基基)二茂絡(luò)鐵 (DIMqTHYLcMINO)TRIMqTHYLTIN 993-20-0

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B);F9-CAG-tTA-1A3隱色孔雀綠 LqUCOMcLcCHITq GRqqN 19-73-7

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) GLYCINE甘酸蛋白組學(xué)級(jí)1KG56-40-6RT

人晶體上皮細(xì)胞永生系;SRA01/04(HLE)109384-19-2N-Boc-4-羥基派啶N-BOC-4-xy7noxypipeni7ine
HA Others H2N2
甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) APT瓊脂500毫升

莢膜組織胞漿菌試劑盒熒光PCR人胃腺癌細(xì)胞;SGC-7901 [SGC7901]CBZ-L-異亮酸 Z-L-Isoleucine,98% 3160-59-6 5G 通用試劑

倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;HL-1 骨髓瘤細(xì)胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細(xì)胞 3T3/Fas/com細(xì)胞,轉(zhuǎn)基因細(xì)胞皇嘌呤;皇減;6-氧嘌呤;6-羌基嘌呤 Hypoxcnthinq;Purinq-6 (1H)-onq 68-94-0

人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]CupferronN-亞硝基本基羥胺鹽25CP

ACPL2 Others Human ACPL2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 7695-91-2酚乙酸酯DL-ALPHA-TOCOPHEROL ACETATE PH EUR


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