產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)
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產(chǎn)品名稱 |
流感病毒N6亞型試劑盒熒光PCR法 |
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規(guī)格 |
50T |
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貨號 |
XG-R63221 |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HDMEC)( 5×105 ) 人少突膠質(zhì)細(xì)胞 Human雷氏曼著色劑質(zhì)量規(guī)格:BSLeishman's
stain
CM-H033人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL來普霉素B 1%溶液質(zhì)量規(guī)格:>95%(HPLC),BCLeptomycin B 1% soluton
DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 醋酸氟氫可的(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量97%-103%,標(biāo)準(zhǔn)品Fludrocortisone acetate
人腦血管平滑肌細(xì)胞HBVSMC醋酸氟氫可的質(zhì)量規(guī)格:>97%Fludrocortisone acetate
HEL細(xì)胞,人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化),M-1細(xì)胞 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-acf阿折地平質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRAzelnidipine
3T3細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞 COLO 205(結(jié)腸癌細(xì)胞) 人腎透明細(xì)胞癌;Caki-1(1S,4S)-N-去甲基鹽酸舍曲林(1S,4S)-N-Desmethyl
Sertraline 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
CSF2 Protein Mouse 重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標(biāo)簽)N-去甲基利福平N-Demethyl Rifampin質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
T-47D(人管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 去甲基波生坦Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
人表皮色素細(xì)胞-淺色素HEM-l羥基去甲基波生坦Hydroxy Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
CD22 Others Human 人 Siglec-2 / CD22 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 波生坦Bosentan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
人正常上皮細(xì)胞;MCF 10AAmresco 進(jìn)分瓊脂粉質(zhì)量規(guī)格:BR,進(jìn)分Agar
人肺動脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC) ( 5×105 )氟伏沙明質(zhì)量規(guī)格:>98%,油狀Fluvoxamine
CL-0325C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2醋酸鋅(二水)質(zhì)量規(guī)格:AR,>98%Zinc acetate
人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細(xì)胞;M619 大鼠胎兒成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL舒巴坦鈉質(zhì)量規(guī)格:BR,>99%Sulbactam
H-4-II-E 大鼠肝細(xì)胞瘤細(xì)胞9-溴芴(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)9-Bromofluorene
大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞;L6UREA尿素超級白色粉末RTsigma
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 十五烷酸 Pentadecanoic acid,99% 1002-84-2 10G 通用試劑
T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mLHE瓊脂 HqKTOqN qNTqRIC cGcR FOR
TU 686細(xì)胞,人喉癌細(xì)胞 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,ECV-304細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-CALCIUMCHLORIDE,ANxy7noUS錄化鈣,無水ACS級白色精細(xì)片狀粉末RTsigma
C-33 A(人子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21079-66-9二本基錄化膦Chlorodipxenylphosphine
流感病毒N6亞型試劑盒熒光PCR法檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。



