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PCR反應(yīng)熔解曲線的解讀
日期：2025-11-02 18:15
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摘要：
PCR反應(yīng)熔解曲線的解讀：
一般來說，根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則，熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度在80~200 bp之間，對(duì)應(yīng)的熔解溫度在80~90℃之間。
在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增的情況下，可以根據(jù)熔解曲線驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性：
1. ·熔解曲線在80~90℃之間出現(xiàn)唯1單峰，表明PCR產(chǎn)物特異性好。
2. ·熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，80℃以下（一般為60~75℃之間）出現(xiàn)雜峰，基本考慮產(chǎn)物中可能存在引物二聚體，可嘗試提高退火溫度、降低引物濃度、重新設(shè)計(jì)引物等方法解決。
PCR反應(yīng)熔解曲線的解讀：
一般來說，根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則，熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度在80~200 bp之間，對(duì)應(yīng)的熔解溫度在80~90℃之間。
在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增的情況下，可以根據(jù)熔解曲線驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性：
1. ·熔解曲線在80~90℃之間出現(xiàn)唯1單峰，表明PCR產(chǎn)物特異性好。
2. ·熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，80℃以下（一般為60~75℃之間）出現(xiàn)雜峰，基本考慮產(chǎn)物中可能存在引物二聚體，可嘗試提高退火溫度、降低引物濃度、重新設(shè)計(jì)引物等方法解決。